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细胞凋亡在多细胞动物的发育过程中起着非常重要的作用。从低等的多细胞动物到人类,细胞凋亡过程非常保守。在秀丽隐杆线虫中,细胞凋亡的核心途径由四个相互作用的蛋白调控:含有BH3结构域的蛋白EGL-1,Bcl-2家族蛋白CED-9,哺乳动物细胞Apaf-1的同源蛋白CED-4以及胱冬肽酶CED-3[1]。在正常的细胞中,CED-4与线粒体膜蛋白CED-9结合而不能激活CED-3,所以凋亡被抑制。而在凋亡细胞中,凋亡起始因子EGL-1与CED-9结合,使CED-9的构象改变,CED-4从CED-4/CED-9的复合物中释放,被释放的CED-4与CED-3的前体蛋白结合促使CED-3激活并促进凋亡[2-4]。但这四个核心蛋白调控凋亡的具体机制尚不清楚。本实验拟通过免疫共沉淀,RNAi Screen和酵母双杂的方法筛选调控凋亡的新因子,以期通过研究这些新因子在凋亡中的作用而进一步阐明细胞凋亡激活的机制。通过免疫共沉淀实验我们得到五个与CED-4相互作用的蛋白:WAN-1,-2,-3,-4和NPP-9。其中,WAN-1是人ANT1的同源蛋白,既能与CED-4相互作用,又能与CED-9相互作用。降低WAN-1的表达量能明显地抑制凋亡,过量表达WAN-1能促进尾部的接触受体神经元细胞PLM的凋亡。这些结果说明WAN-1是线虫凋亡过程中重要的调控因子。NPP-9是一个核孔复合物成分,降低NPP-9的表达量引起胚胎死亡,成虫性腺发育不正常,核结构破坏,说明NPP-9在维持核的完整结构方面起着重要的作用,但是NPP-9是否调控细胞凋亡尚需进一步深入研究。通过酵母双杂实验我们得到了与CED-4相互作用的蛋白FO8F8.9。FO8F8.9是一个DNA介导的RNA聚合酶,通过RNAi降低该蛋白的表达能显著减少胚胎及性腺凋亡细胞的数目,还能增加CED-4突变体中咽部存活细胞的数目,说明FO8F8.9参与细胞凋亡调控。另外,通过RNAi筛选我们发现了一个 E3 ligase EEL-1。EEL-1可能具有促进凋亡和抑制凋亡的双重功能,但其调控细胞凋亡的机制的研究正在进行。由于从线虫到人的凋亡激活过程非常保守,所以我们希望通过研究秀丽隐杆线虫中调控细胞凋亡新因子的功能进一步阐明凋亡的调控机制。这对研究哺乳动物细胞中的凋亡调控机制以及由凋亡缺陷造成的疾病的治疗都将提供有益的线索和帮助,并将有助于我们对其它生物学通路的认识。