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应激是指个体在受到外界强烈或有害的刺激时出现的综合性应答状态,包括精神、神经、内分泌和免疫等方面的反应。应激对健康具有双重意义,适度的应激有助于学习与记忆,但慢性、长期应激则会对机体造成不同程度的损伤,严重时出现抑郁症、学习记忆障碍、应激性精神紊乱、痴呆、免疫力低下等多系统疾患。下丘脑-垂体-肾上腺皮质(Hypothalamus-pituitary-adrenal cortex,HPA)轴激活是应激反应的最重要特征。研究表明,慢性应激或皮质醇增多可导致中枢神经系统中海马、杏仁核、下丘脑和前额叶皮层等脑区的氧化应激状态增强,细胞坏死、树突萎缩等,并可导致纹状体单胺类神经递质的含量下降。 天然的黄酮类化合物具有广泛的生物学活性,大量研究表明黄酮类化合物可用于预防和治疗慢性应激引起的抑郁、焦虑以及学习与记忆能力减退等。其中,杨梅黄酮具有非常强的抗氧化、螯合金属离子等作用,一些实验也证实了杨梅黄酮对神经退行性疾病的保护作用。但尚未有杨梅黄酮拮抗慢性应激引起的抑郁、学习与记忆能力减退等的相关报道。本实验采用强迫游泳、悬尾实验以及水迷宫等一系列的行为学测试方法,观察了经反复禁锢后,小鼠抑郁样行为、空间学习与记忆能力的改变,并应用酶联免疫吸附试验(ELISA)观察了小鼠血浆中促肾上腺皮质激素(Adrenocorticaltrophic hormone,ACTH)和皮质酮的含量以及小鼠海马中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽还原酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)的活性,同时观察了杨梅黄酮对这些改变的影响,为杨梅黄酮对慢性应激引起的抑郁及学习与记忆功能减退的治疗和预防提供有价值的理论和实验依据。实验结果表明: 1.与对照组相比,反复禁锢慢性应激模型小鼠在强迫游泳实验中的不动时间显著延长(P<0.001),杨梅黄酮(50mg/kg)连续21天给药,完全逆转了应激小鼠在强迫游泳实验中不动时间的增加(P<0.001)。与对照组相比,单独应用杨梅黄酮对小鼠的不动时间没有影响(P>0.05)。 2.悬尾实验中,反复禁锢慢性应激模型小鼠的不动时间显著延长,与对照组相比具有显著性差异(P<0.001),杨梅黄酮(50mg/kg)连续21天给药,完全逆转了应激小鼠在悬尾实验中不动时间的增加(P<0.01)。与对照组相比,单独应用杨梅黄酮对小鼠的不动时间没有影响(P>0.05)。 3.旷场实验中,与对照组相比,反复禁锢慢性应激模型小鼠在中心区域(50%)和外周区域(50%)的时间均没有改变(P>0.05)。应用杨梅黄酮对小鼠在旷场中心区域和外周区域的时间也没有影响(P>0.05)。 4.水迷宫实验中,与对照组相比,反复禁锢慢性应激模型小鼠训练期间的逃避潜伏期无差异(P>0.05)。应用杨梅黄酮对小鼠在训练期间的逃避潜伏期无影响(P>0.05)。 5.水迷宫实验中,第5天测试时,反复禁锢慢性应激模型小鼠在目标象限与毗连象限的时间无差异(P>0.05),而对照小鼠和杨梅黄酮处理小鼠在目标象限的时间显著长于毗连象限(P<0.001)和对侧象限(P<0.001)。 6.水迷宫实验中,第7天测试时,各组小鼠在目标象限的时间显著长于毗连象限和对侧象限(P<0.001)。与对照组相比,反复禁锢慢性应激模型小鼠在目标象限的时间显著减少(P<0.05),杨梅黄酮(50mg/kg)连续21天给药,完全逆转了应激小鼠在目标象限时间的减少(P<0.001)。 7.与对照组相比,反复禁锢慢性应激模型小鼠血浆ACTH水平显著升高(P<0.001),杨梅黄酮(50mg/kg)连续21天给药,完全逆转了应激小鼠ACTH的升高(P<0.001)。与对照组相比,单独应用杨梅黄酮对小鼠的血浆ACTH水平无影响(P>0.05)。 8.与对照组相比,反复禁锢慢性应激模型小鼠血浆皮质酮水平显著升高(P<0.001),杨梅黄酮(50mg/kg)连续21天给药,完全逆转了应激小鼠皮质酮的增加(P<0.001)。与对照组相比,单独应用杨梅黄酮对小鼠的血浆皮质酮水平无影响(P>0.05)。 9.与对照组相比,反复禁锢慢性应激模型小鼠海马谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性显著降低(P<0.01),杨梅黄酮(50mg/kg)连续21天给药,部分逆转了应激小鼠GSH-PX活性的降低(P<0.05)。与对照组相比,单独应用杨梅黄酮对小鼠的海马GSH-PX水平无影响(P>0.05)。 上述结果提示,反复禁锢慢性应激模型小鼠可引起抑郁样症状,并造成空间学习与记忆能力减退,而给予杨梅黄酮处理,可显著改善应激小鼠的抑郁样行为和空间学习与记忆能力。杨梅黄酮对慢性应激小鼠抑郁样行为及学习记忆能力的保护作用可能是通过杨梅黄酮减弱了海马区的氧化应激,降低了小鼠血浆中ACTH和皮质酮的水平实现的。本研究为应用杨梅黄酮预防和治疗慢性应激引起的抑郁症和学习记忆功能减退提供了实验依据。