鳜鱼(Siniperca Chuatsi)是我国重要的养殖品种，而近年来传染性脾肾坏死病毒(jinfectious spleen and kidney necrosis virus，ISKNV)对鳜鱼养殖造成了严重的经济损失。为了研究病毒与宿主的相互作用，在ISKNV感染鳜鱼的抑制性消减杂交cDNA文库基础上，经NCBI数据库比对分析后发现有一个与泛素连接酶E3基因序列比较相似的EST(expressed sequence tag，EST)。泛素连接酶E3是UPP(ubiquitin proteasome pathway)途径中一种重要酶，对底物蛋白的特异性识别起重要作用。 根据以上EST，通过cDNA末端快速扩增技术成功获取了鳜鱼E3基因的cDNA全长。该基因cDNA全长3833 bp，有一个330 bp的5非翻译区(5-UTR)和一个932 bp的3非翻译区(3-UTR)，在3非翻译区有一个很典型的加尾信号(AATAAA)。E3全长cDNA含一个长达2571 bp的开放阅读框(open readingframe，ORF)，编码856个氨基酸的蛋白质，经生物信息学分析，预测该蛋白分子量为98195.52 Daltons，等电点为5.054。比对发现该蛋白为一种E6-AP的泛素连接酶，在其C端有一个保守的约350个氨基酸的HECT(Homologous to theE6-AP Carboxyl Terminus)结构域。实时荧光定量PCR检测组织分布的结果显示，该E3基因几乎在各个组织中都有分布。其中，血细胞中的含量最高，而腮中最少。进行了鳜鱼E3的大肠杆菌原核表达。以pGEX-4T-1原核表达载体成功构建了pGEX-E3质粒并分别转化BL21(DE3)后获得了目的蛋白的高效表达，且表达蛋白可溶性良好。蛋白印迹实验证实了正确表达了目的蛋白。为了进一发研究该基因的功能，采用经典的体外泛素化实验，验证该E3泛素连接酶的活性。采用UbcH2，UbcH3，UbcH5a，UbcH5c，UbcH7，UbcH9，UbcH10，UbeH12，E2-MF(鳜鱼E2)8种不同类型的泛素聚合酶E2与该E3进行体外泛素化实验，发现其可以与UbcH5a以及UbcH7协作完成体外泛素化；另外还跟鳜鱼的自身的泛素聚合酶E2作用，并且两者之间体外泛素化作用最强。这些结果表明该蛋白具有E3泛素连接酶活性。本文首次从鳜鱼中获得E3全长cDNA序列，并证明了其泛素连接酶活性。UPP途径是生命活动过程中重要的蛋白代谢途径之一，因此，本文为UPP途径在鳜鱼体内生理作用的研究奠定了坚实的基础，同时也为进一步研究鳜鱼与病毒侵染过程中UPP途径的作用开拓了方向，对于研究ISKNV与宿主间的相互作用具有重要的意义。