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目前,多数白血病可通过化疗诱导完全缓解(complete remission,CR).但是长期无病生存率却不到50％,5年生存率仅为15％左右.众所周知,几乎所有的病人在CR后仍存在微小残留病灶(minimal residual disease,MRD),这是导致复发的主要原因.人们发现,接受异基因干细胞移植(allo-stem celltransplantation,allo-SCT)的病人,由于产生了移植物抗白血病(graf-versus-leukemia,GVL)反应,因此复发率相对较低.GVL效应对清除MRD大有裨益,在allo-SCT后继续对部分患者输注供体淋巴细胞(donor lymphocyteinfusion,DLI),可诱导细胞遗传学及分子生物学水平的缓解.那么,对于不进行allo-SCT的病人,如何诱导产生类似的GVL呢?人们正在尝试进行特异的免疫治疗,以清除化疗缓解后的MRD.其中的策略之一就是诱导生成白血病细胞特异性的细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs).白血病细胞逃逸免疫监视主要与共刺激因子或粘附因子表达低、分泌抑制免疫应答的细胞因子等有关.白血病细胞的抗原不能被有效提呈,以致于不能被宿主T细胞识别和清除.如何将白血病细胞抗原有效地提呈给T细胞,并激活T细胞免疫应答是免疫治疗的关键.材料与方法:1材料.1.1脐血标本.12份脐血样本均采自剖宫产的足月胎儿脐带,肝素抗凝(20IU/ml),平均采血量75ml.脐血单个核细胞(MNCs)以密度离心法收集.1.2骨髓标本.白血病骨髓样本采自12名初诊的白血病患者.缓解期骨髓样本于化疗结束、骨髓细胞形态学证实CR后采集,密度离心法分离MNCs.1.3主要试剂.Ficoll分离液;RPMI1640培养基;分析纯碳酸氢钠粉剂;胎牛血清(fetal calf serum,FCS);PBS缓冲液(PH7.0);抗CD3免疫磁珠;细胞因子(rGM-CSF,IL-4,TNF-α,rIL-2);抗CD3单克隆抗体;免疫荧光抗体:(PE-CD1a,PE-IgG<,1>,PE-HLA-DR,FITC-CD86,FITC-IgG<,1>,FITC-CD83,FITC-IgG<,2b>,FITC-CD4/PE-CD8/CY5-CD3及同型对照);瑞氏-姬姆萨染色试剂;台盼蓝染液;trinton X-100;二甲基亚砜(DMSO)溶液.1.4细胞株K562细胞株.1.5主要仪器.塑料细胞培养瓶;96孔培养板;CO<,2>孵箱;无菌操作台;离心机;液氮罐;恒温水浴箱;流式细胞仪(FCM);血细胞照射仪;全自动生化分析仪;倒置显微镜;光学显微镜:医学显微图像应用系统.2研究方法.2.1脐血DCs的体外诱导.应用贴壁法将脐血MNCs分为贴壁细胞与非贴壁细胞,前者加GM-CSF及IL-4用于诱导DCs.后者分为两组:一组不加任何刺激因子,仅以含10％FCS的完全培养基(CM)培养;另一组加抗CD3单抗及IL-2用于诱导CTLs.每3天加入细胞因子一次,第6天加TNF-α,第8天收集非贴壁细胞.2.2观察指标.倒置显微镜观察形态;DCs的生长曲线;FCM检测其表面标志.2.3统计学分析.采用SPSS11.5统计软件包,对数据进行单因素方差分析.结论:1、在GM-CSF、IL-4和TNF-α联合培养8天后,脐血单个核细胞可被诱导成形态典型、功能成熟的树突状细胞.2、成熟的负载白血病抗原的脐血DCs,可诱导脐血T细胞生成白血病细胞特异性的CTLs,该CTLs对同一白血病细胞有明显的杀伤作用.3、CTLs对AML细胞的杀伤强于对ALL细胞的杀伤.4、CTLs对原代白血病细胞的杀伤为高度特异性,对患者缓解期骨髓单个核细胞杀伤率极低.5、用低浓度IL-2刺激的脐血淋巴细胞对K562细胞株存在较高的杀伤活性,对原代白血病细胞的杀伤活性较未经刺激的脐血淋巴细胞略高,但明显低于CTLs.6、未经DCs刺激或细胞因子培养的脐血淋巴细胞对K562细胞株或原代白血病细胞杀伤活性极低.