淡紫拟青霉培养优化及类植物生长素的初分离

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本文就淡紫拟青霉PL-HN-16菌株对两种线虫进行毒力测定,确定其杀虫活性后,优化筛选出适宜该菌生长产孢的固体培养基配方及麸皮固体发酵的条件,将使用优化后配方生产的菌剂进行田间药效试验,并对该菌产生的促进植物生长的类植物生长素物质进行了初步的分离。 研究表明淡紫拟青霉PL-HN-16菌株对根结线虫和松材线虫都有一定的毒杀作用,且对根结线虫的致病性较强。孢子悬浮液处理两种线虫幼虫24h后,相对致死率达到了32.8%和21.5%,48h后升高到59.2%和41.7%,在菌丝对虫卵及幼虫的处理中,在处理24h~48h的时段内,菌丝对根结线虫幼虫的寄生率由26.8%增加到42.3%,对卵的寄生率由20.3%增加到31.5%,增幅分别为15.5%和11.2%,松材线虫的处理中,增幅分别为7.8%和8.3%。 通过正交试验得到了适合该菌生长产孢的固体培养基配方及条件是:蔗糖60g/L,硝酸铵1.5g/L,初始pH值6.0,温度30℃;孢子萌发的测定结果表明,温度控制在3~37℃;初始pH值在6.0~7.0的范围内适宜孢子的产生及萌发:添加了优化配方的处理在48h、72h和96h的孢子数量较未添加优化配方的处理孢子数量分别提高了5.43×10<8>个/g、1.42×10<9>个/g 和1.21×10<10>个/g,处理问差异显著。在麸皮发酵培养条件优化中,麸皮与水的最佳配比(W/V)为1:1;前期摇动培养基,后期不摇动,比较适宜该菌的菌丝生长及孢子的萌发。 田间药效试验结果表明,施药2周,菌剂处理组番茄根结线虫平均虫口减退率为74.87%,花期前与结果期平均虫口减退率达到了84.26%和93.45%,且较化学药剂的持效期长,菌剂40g/株处理防治效果最好,药后25天防效为72.6%,药后50天仍达到66.4%。施用菌剂的番茄植株地上部分平均鲜重比对照增加92.9%,植株高度增加71.86%,根系和叶片长度分别比对照增加了39.02%和26.69%,其中以鲜重增加最为显著。对番茄、丝瓜和茄子根结线虫的田间防治试验结果表明,施用淡紫拟青霉菌剂的处理病情指数分别比对照降低44、23和20。 淡紫拟青霉PL-HN-16菌株产类植物生长素的研究试验中,发酵培养液对菜心种子的生长调控作用的测定表明,发酵培养液中含有促进植物生长的类植物生长素,且在低浓度的状态下对植物的生长有促进的作用,在高浓度的状态下,则表现出抑制的效果。 对培养液中活性物质提取并生测的试验结果表明,有机溶剂萃取物中水层部分有刺激菜心种子生长的作用,而有机层无活性;柱层析所得的3个流分,低浓度的情况下对生长有促进作用,高浓度的情况下则表现抑制作用。硫酸铵分级沉淀试验结果表明,硫酸铵饱和度45%和60%所沉淀的蛋白对菜心种子的生长均具有促进作用,SDS-PAGE分析结果显示,培养中期培养液中的蛋白成分和含量较少,而前期和后期的蛋白含量较多。结合硫酸铵分级沉淀法对发酵培养液进行对植物生长调控作用的测定结果与SDS-PAGE分析可推测,主要的活性蛋白是分子量为36KD的蛋白。
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