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柑桔黄龙病(CitrusHuanglongbing)是世界性柑桔生产上的一种毁灭性病害。目前除严格防治柑桔木虱和挖除病树外,国内外对柑桔黄龙病尚无很好的根除方法,唯有通过建立无病苗圃及加强植物检疫措施防止病害传入。因此,加强病害的早期诊断和检测技术的研究尤为重要。
本研究以现代分子生物学技术为主要研究手段,通过在健康柑桔植株上人工嫁接接种黄龙病病原,探索黄龙病病原在植株体内的运转规律。改进柑桔木虱DNA抽提方法,建立一套完整的从柑桔木虱体内快速检测病原的方法。在菟丝子中检测到黄龙病病原,并对该病原的DNA片段进行克隆与测序。应用PCR技术,证实九里香植物是黄龙病病原的寄主。收集各种不同类型的未显症状柑桔材料,对这些材料的准确、快速的检测方法进行系统地研究。
主要研究结果如下:
(1)初步推测出黄龙病病原在柑桔植株体内的运转规律。黄龙病病原入侵植株后,同时在植株内向上和向下扩展,向下扩展的速度要明显快于向上的速度,最终到达植株各部位。这为制定柑桔黄龙病防治策略提供科学依掘。
(2)对柑桔木虱采用新制样的方法,无需抽提DNA,整个制样的过程仅需lh左右。试验步骤简单,操作方便,制样后的样品即用或一20℃保存备用均可。应用常规PCR,在单头柑桔木虱体内检测到黄龙病病原,成功地建立从柑桔木虱中快速检测黄龙病的病原方法。
(3)在菟丝子中检测到病原,首次对菟丝子中黄龙病病原16srDNA和β-操纵子部分DNA片段进行了分子克隆与序列测定,该部分序列丰富了柑桔黄龙病病原的基因库内容,也为进一步研究提供了资料。由于菟丝子本身无叶,都是维管束组织,因此可将菟丝子作为黄龙病病原的繁殖寄主,从事病原分离培养与体外繁殖研究。
(4)应用常规PCR检测技术,证实存在较大争议的九里香是黄龙病病原寄主,同时感病后能表现斑驳和黄化症状,在柑桔园附近应避免种植。
(5)按不同的比例混合病、健叶片,进行PCR检测,发现只要有一片病叶片存在就能检测到黄龙病病原。收集各种不同类型的未显症状柑桔样品,对这些材料的准确、快速的检测方法进行系统地研究。这对有效地防止带病苗木的传播及柑桔黄龙病的早期诊断、早期防治具有重要的应用价值。