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电压门控钠离子通道是神经细胞兴奋传导的基础,也是杀虫剂最主要的作用靶标。本研究采用全细胞膜片钳技术,研究了新型邻甲酰胺基苯甲酰胺类杀虫剂氯虫酰胺对急性分离的甜菜夜蛾幼虫中枢神经细胞电压门控钠离子通道的影响。主要研究内容及结果如下:
⑴在电流钳位模式下分析了氯虫酰胺对甜菜夜蛾神经元动作电位的影响。400ppm的氯虫酰胺作用1min,3min,5min后的动作电位幅值分别为(94.366±4.596)mV、(90.363±2.258)mV、(83.15±2.959)mV,时程分别为(5.025±0.884)ms、(6.032±0.073)ms、(6.387±0.376)ms,药物作用5min后只能产生电紧张,无法发放动作电位。结果表明,较高浓度氯虫酰胺可以降低细胞膜兴奋性,并且对动作电位幅值降低和时程延长的作用具有时间依赖性。
⑵在外液中施加10ppm、100ppm、200ppm三个浓度氯虫酰胺对电压门控钠通道功能的影响。10ppm药物作用1min、5min、15min后的平均钠电流幅值分别是(-8.941±0.59)nA,(-10.711±0.466)nA,(-7.233±0.289)nA,5min时Ina为初始值的1.228倍;加药前后激活曲线与失活曲线变化不显著,无统计学意义。100ppm药物作用1min、5min、15min后的平均钠电流幅值分别是(-9.627±0.114)nA,(-11.668±0.131)nA,(-8.726±0.398)nA,5min时峰电流值为初始电流的1.316倍;激活曲线的Vh与k值无明显变化;失活曲线Vh与k值变化显著,加药前后V1/2inact分别是(-44.049±1.758)mV和(-38.837±1.572)mV,k值分别为(7.314±0.639)和(6.347±0.962)。200ppm药物作用1min、5min、15min后的平均钠电流幅值分别是(-8.761±0.67)nA,(-8.713±0.46)nA,(-5.305±0.382)nA;激活曲线变化明显,加药前后V1/2act分别是(-27.739±1.312)mV和(-25.379±0.833)mV,k值分别是(2.809±0.041)和(2.198±0.066);失活曲线右移,加药前后V1/2inact分别是(-44.049±1.758)mV和(-36.363±1.521)mV,k值分别是(7.314±0.639)和(6.312±0.775)。
⑶作用结果表明,氯虫酰胺能显著影响甜菜夜蛾幼虫中枢神经元的兴奋性。使电压门控钠通道电流密度和通道功能发生改变。氯虫酰胺对钠通道电流的作用明显具有浓度和时间依赖性。中低浓度(10ppm和100ppm)条件下,药物对激活电压无明显影响,可使钠峰值电流增加,在药物作用5min时增幅最大,但随着用药时间的延长这一效果弱化;较高浓度(200ppm)药物对峰值电流的增加作用较为不突出,甚至在药物作用十分钟后表现出抑制峰电流的趋势,促使激活曲线和失活曲线的明显右移。实验结果说明甜菜夜蛾中枢神经细胞钠离子通道是氯虫酰胺药物的作用靶标之一。不同药物浓度以及不同的作用时间对神经元钠电流影响不同。