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微丝解聚因子家族(AC蛋白家族)是肌动蛋白结合蛋白,是微丝骨架的一个重要调节者。AC蛋白家族能够截断微丝,促进微丝解聚和肌动蛋白单体循环,调控微丝骨架的重建,进而影响与微丝骨架相关的一些生理功能如细胞增殖、细胞迁移、细胞凋亡及胚胎发育等。目前有关AC蛋白家族在哺乳动物卵巢中的表达和作用还没有报道。本文利用原位杂交、northernblot方法.检测cofilin1,cofilin2,destrin三个AC蛋白家族成员在大鼠卵泡发育、围排卵期、黄体形成和退化过程中的表达变化。
在PMSG处理的大鼠卵泡发育过程中,原位杂交结果表明:cofilin1在未分化卵泡膜上有较强的阳性信号,在分化的有腔卵泡内膜上均检测cofilin1的较强的阳性信号。在PMSG/HCG诱导的黄体化(排卵前后)过程中,cofilin1在HCG处理后的0h,4h的排卵前的有腔卵泡内膜上表达。接近排卵期的卵泡膜细胞和颗粒细胞上cofilin1信号达到峰值,排卵后黄素化的过程中cofilin1mRNA维持较高的表达。在促性腺激素诱导的黄体形成和退化过程中,HCG处理后的第2天,刚刚形成的的黄体上检测到cofilin1强的阳性信号,处理后第4,8天信号减弱;第14天cofilin1信号增强,第18,22天有所减弱;Northernblot结果表明,HCG处理后第2天的cofilin1mRNA的水平显著较高,随后第4,8天明显降低,第14天又升高,第18,22天有所减弱。cofflin1mRNA在妊娠黄体模型中的表达与促性腺激素诱导的黄体形成和退化模型类似。原位杂交结果表明在妊娠第2天cofilin1的信号较强,在妊娠第4,8,13天较弱,第18,22天增强。Northernblot结果表明:在妊娠第2天cofilin1mRNA的水平较高。第4,8,13降低,第18,22升高。以上结果表明:cofilin1mRNA定位在未分化的卵泡膜上和分化的卵泡内膜上,提示cofilin1可能与卵泡膜的生长分化及功能有关。在排卵前后的卵泡壁上强表达提示cofilin1可能在排卵及颗粒细胞黄素化过程中有作用。在黄体的形成和结构性退化中较强的表达,其可能参与黄体化过程及黄体的形成和退化。
原位杂交结果表明:在PMSG处理的卵泡发育过程中,destrinmRNA在腔前卵泡膜上有微弱的阳性信号,在有腔卵泡的卵泡内膜上较强表达;PMSG/HCG诱导的黄体化(排卵前后)过程中,destrinmRNA的阳性信号逐渐由内膜向外扩展到卵泡外膜及膜层颗粒细胞,在排卵前的整个卵泡的膜细胞和壁层颗粒细胞上信号较强,排卵后的黄素化细胞上维持较高水平的表达。在促性腺激素诱导的黄体形成和退化模型中,在HCG处理后的第2天刚刚形成的黄体上观察到明显的destrinmRNA的阳性信号,在第4,8天明显减弱,第14,17,21天destrin的信号较强;Northernblot结果表明,HCG处理后的第2天destrinmRNA的水平最高,第4,8天显著降低,在第14天以后,水平逐渐升高。在妊娠黄体模型中,原位杂交检测结果表明:在妊娠第2天的黄体上有较强的destrin阳性信号,随后的第4,9,13明显减弱,第18,22信号增强;Northernblot结果表明在destrinmRNA在妊娠黄体中表达差异显著,在妊娠第2天destrinmRNA的水平最高,第4天降低,在第9,13天达到几乎检测不到的水平,第18,22天明显升高。以上结果表明,destrin定位在未分化的卵泡膜和分化的卵泡内膜上,提示destrin也可能与卵泡膜的发育及功能相关。在排卵前的卵泡壁及颗粒细胞上的大量表达推测其可能参与排卵过程及颗粒细胞黄素化过程。此外destrin在黄体的形成和退化期有较强表达,提示其可能参与黄体的形成和退化。
在整个卵泡发育、排卵及黄体的形成和退化过程中,基本没有检测到cofilin2的明显表达。
因此,cofilin1和destrin在未分化的卵泡膜及分化的卵泡内膜上特异性表达,提示其可能与卵泡膜的分化及功能相关;cofilin1和destrin在排卵前的卵泡壁及壁层颗粒细胞上高水平表达说明其可能在排卵过程中起到重要的作用,并且在排卵前后黄素化过程中持续较强的表达,提示它们参与黄体化过程。此外,它们在黄体形成和退化过程中的较强表达推测可能参与黄体形成和退化过程中有一定的作用。