痿症方联合嗅鞘细胞移植治疗脊髓慢性损伤的实验研究

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目的:探索痿症方联合嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植对脊髓慢性损伤(chronic spinal cord injury,CSCI)的作用及机理,初步了解脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后OECs移植延缓SCI、帮助脊髓恢复的作用,观察痿症方促进OECs移植治疗CSCI的效果。 方法:以CSCI为研究点,以大鼠OECs的原代培养、血清药理学、慢性脊髓压迫损伤模型为基础,通过痿症方联合OECs移植的治疗作用,以CBS功能评分进行脊髓功能评定;光镜、电镜观察脊髓组织形态学的改变;免疫组织化学法观察脊髓组织中神经营养因子(never growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)、神经营养 3(Neurotrophin-3,NT-3)蛋白的表达与分布,酶联免疫吸附法(enzyme linked limmunosorbent assay,ELISA)检测各组脊髓组织中NGF、BDNF、NT-3蛋白的浓度,实时荧光定量PCR(Real Time RT-PCR)方法检测各组脊髓组织中NGF、BDNF、 NT-3mRNA的表达。 结果:①酶消化法培养出新生大鼠嗅球的OECs,其表达特征性NGFRp75;②痿症方5倍剂量灌胃,末次给药1小时后腹主动脉采血,制备血清后,以10%的浓度培养,为促进大鼠OECs增殖的优选方案;③OECs移植、痿证方均能在一定程度上改善大鼠脊髓功能(P<0.05);痿证方中药血清培养的OECs移植对慢性脊髓压迫后功能改善有明显积极作用(P<0.05),但三者之间在统计学上无明显差异(P>0.05);④OECs移植、痿证方、痿证方含药血清培养的OECs移植均能部分改善大鼠脊髓灰质神经细胞的凋亡程度,延缓白质神经纤维的减少,促进髓鞘的修复与再生;⑤与模型组、DF12组比较,痿症方和OECs移植治疗后脊髓组织中 NGF、BDNF、NT-3表达均明显增加(P<0.05~0.01),其中以NT-3的增加最为显著;痿症方含药血清培养的OECs移植与单纯OECs移植相比,对脊髓组织中NGF、BDNF、NT-3表达的增加明显增加(P<0.05~0.01),但与单纯痿症方相比在统计学上无显著差异(P>0.05)。 结论:痿症方和OECs移植均能够减轻脊髓慢性压迫后的功能损害,部分改善SCI后脊髓组织的病理形态,促进脊髓组织中NGF、BDNF和NT-3的表达,是防止SCI进一步发展的有效措施。痿症方能加强OECs移植促进脊髓组织中NGF、BDNF和NT-3的表达的作用,与单纯痿症方相比,未能在以上几个方面体现出优势,说明作用机制有待进一步深入研究。
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