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自1981年确认第一例艾滋病人以来,已经有超过2500万人死于艾滋病(AIDS)。最新统计显示,现在全球范围内约有3340万HIV感染者,并且每年仍有约200万感染1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)的新增病例。然而,由于HIV-1的特殊性,至今尚未研制成功有效的抗HIV-1感染的疫苗。为了诱导机体产生有效的免疫应答,研究人员尝试了不同的免疫策略。其中一个有效的策略为含HIV-1相关基因的DNA质粒初免,再用HIv-i的蛋白加强免疫。研究结果显示,这种免疫策略能诱导较好的免疫效果。同时,研究人员也开发出了不同形式的疫苗,其中病毒样颗粒(VLP)能模拟病毒粒子结构并在表面展示目的蛋白,但不包含病毒基因组,因此具有很好的免疫原性及安全性。相比传统的疫苗形式,病毒样颗粒能同时诱导抗体应答及细胞免疫应答,因而受到人们的关注。本研究主要内容包括:
⑴H3N2流感病毒HA跨膜区重组HIV外膜蛋白胞外区真核表达载体免疫小鼠的免疫效果评价。选择HIV-1 pNL4-3来源的膜蛋白基因gp120、gp41及gp140进行重组构建,将其分别连接到pcDNA3.1(+)载体,目的基因后加入了H3N2流感病毒HA基因的跨膜区。将重组表达载体用于DNA初免疫,同时设计了无跨膜区gp140真核表达质粒的对照,然后选择了果蝇细胞表达的包含有HIV包膜蛋白的病毒样颗粒作为加强免疫原,对SPF级BALB/c小鼠进行了免疫。本论文比较了不同的免疫源免疫后的体液及细胞免疫效果。得到初步的结论为:在小鼠体内,经C端含跨膜区的gp140质粒初免并用病毒样颗粒加强免疫后,其诱导产生的特异性抗体滴度最高。本实验结果对以后HIv-i疫苗的设计提供一定的参考依据。
⑵利用杆状病毒表达系统表达含H3N2流感病毒HA跨膜区重组HIV外膜蛋白胞外区融合蛋白的病毒样颗粒。杆状病毒表达系统(BEVS)作为常见的表达系统,已经广泛用于真核蛋白的表达。本课题旨在利用杆状病毒表达系统表达出包含HIv-1包膜蛋白的病毒样颗粒,但由于本室系统的不成熟,仅完成以下工作:重组杆状病毒克隆的构建、快捷的杆状病毒滴度测定方法的建立、重组Bacmid质粒转染sf9细胞及表达的重组包膜蛋白的鉴定。重组杆状病毒表达蛋白的大量表达、纯化及免疫原性还需要进一步的研究。