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目的:课题组前期研究发现红景天苷能够降低TGF-β2诱导的小梁网细胞外基质蛋白的累积,并能够降低高眼压小鼠模型的眼压,本研究在验证红景天苷改善小梁网纤维化的基础上进一步探究红景天苷改善小梁网纤维化的关键因子。
方法:培养人原代小梁网细胞,用5ng/mLTGF-β2诱导小梁网细胞48小时,用免疫印迹方法对人小梁网细胞中纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)、层粘连蛋白(Laminin ,LN)、IV型胶原蛋白(Collagen IV,COL-IV)进行检测,用5ng/mLTGF-β2诱导小梁网细胞48小时,再用含有30μM红景天苷的培养液继续培养24h,用免疫印迹方法对人小梁网细胞中纤维连接蛋白(Fibronectin, FN)、层粘连蛋白(Laminin ,LN)、IV型胶原蛋白(Collagen IV,COL-IV)进行检测。构建TGF-β2过表达腺病毒载体(Ad.hTGF-β2226/228),小鼠一侧眼睛的玻璃体腔内注射2μL的Ad.hTGF-β2226/228构建高眼压小鼠模型,对侧眼不注射或者注射空载腺病毒作为对照,红景天苷眼液每日1滴干预上述动物模型,用TonoLab反弹式眼压计测量清醒状态下小鼠眼压改变;采用Labelfree质谱分析的方法检测红景天苷干预TGF-β2细胞因子诱导纤维化的小梁网细胞中蛋白的改变,筛选红景天苷作用后纤维化小梁网细胞中改变最明显的细胞因子。
结果:在正常人原代小梁网细胞中TGF-β2细胞因子诱导48小时可引起小梁网细胞纤维化指标升高,而加入红景天苷干预24小时后小梁网细胞中的纤维化指标明显下降。在Ad.hTGF-β2226/228诱导的高眼压小鼠模型中,红景天苷滴眼液干预11天后能够明显的降低高眼压小鼠模型眼压,Labelfree质谱检测分析可得出与红景天苷改善小梁网细胞纤维化相关的蛋白分别为:SIPA1L1,CTGF,TGM2,SYNEM,PTTG,其中信号诱导增殖相关1样蛋白1(Signal-induced proliferation associated-like protein 1,SIPA1L1)受红景天苷影响最大。
结论:红景天苷可改善人原代小梁网细胞纤维化;红景天苷眼液可降低高眼压模型小鼠的眼压;Labelfree质谱分析结果提示红景天苷改善小梁网纤维化作用的关键因子可能为SIPA1L1。
方法:培养人原代小梁网细胞,用5ng/mLTGF-β2诱导小梁网细胞48小时,用免疫印迹方法对人小梁网细胞中纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)、层粘连蛋白(Laminin ,LN)、IV型胶原蛋白(Collagen IV,COL-IV)进行检测,用5ng/mLTGF-β2诱导小梁网细胞48小时,再用含有30μM红景天苷的培养液继续培养24h,用免疫印迹方法对人小梁网细胞中纤维连接蛋白(Fibronectin, FN)、层粘连蛋白(Laminin ,LN)、IV型胶原蛋白(Collagen IV,COL-IV)进行检测。构建TGF-β2过表达腺病毒载体(Ad.hTGF-β2226/228),小鼠一侧眼睛的玻璃体腔内注射2μL的Ad.hTGF-β2226/228构建高眼压小鼠模型,对侧眼不注射或者注射空载腺病毒作为对照,红景天苷眼液每日1滴干预上述动物模型,用TonoLab反弹式眼压计测量清醒状态下小鼠眼压改变;采用Labelfree质谱分析的方法检测红景天苷干预TGF-β2细胞因子诱导纤维化的小梁网细胞中蛋白的改变,筛选红景天苷作用后纤维化小梁网细胞中改变最明显的细胞因子。
结果:在正常人原代小梁网细胞中TGF-β2细胞因子诱导48小时可引起小梁网细胞纤维化指标升高,而加入红景天苷干预24小时后小梁网细胞中的纤维化指标明显下降。在Ad.hTGF-β2226/228诱导的高眼压小鼠模型中,红景天苷滴眼液干预11天后能够明显的降低高眼压小鼠模型眼压,Labelfree质谱检测分析可得出与红景天苷改善小梁网细胞纤维化相关的蛋白分别为:SIPA1L1,CTGF,TGM2,SYNEM,PTTG,其中信号诱导增殖相关1样蛋白1(Signal-induced proliferation associated-like protein 1,SIPA1L1)受红景天苷影响最大。
结论:红景天苷可改善人原代小梁网细胞纤维化;红景天苷眼液可降低高眼压模型小鼠的眼压;Labelfree质谱分析结果提示红景天苷改善小梁网纤维化作用的关键因子可能为SIPA1L1。