【摘 要】
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1.研究意义 该课题从PCR衍生技术和寡核苷酸芯片技术两条途径入手,旨在提出问题,发现问题,改进技术,完善技术.2.研究方法 该研究一方面应用基于PCR的衍生技术进行SNPs检测,以
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1.研究意义 该课题从PCR衍生技术和寡核苷酸芯片技术两条途径入手,旨在提出问题,发现问题,改进技术,完善技术.2.研究方法 该研究一方面应用基于PCR的衍生技术进行SNPs检测,以耐药基因SHV中SNPs的检测为靶标,对检测方法的可行性、实验条件的最佳化和改良进行探讨,建立行之有效的检测条件.3.研究成果 3.1基于PCR衍生技术的SNPs检测技术 3.1.1 建立以耐药基因SHV中SNPs的检测的研究靶标,尤其构建其两个亚型的克隆,为各种实验方法的评价提供已知模板,便于对检测方法优化和检测结果的分析.3.1.2 提出在SSP-PCR的引物设计中,建议在特异性引物3末端2~4位引入错配碱基比不引入错配能更好地提高对SNPs等位基因的分辨能力,使最佳退火温度范围加大,检测条件更易于优化.3.2 基于寡核苷酸芯片的SNPs检测技术 3.2.1 建立了HLA-A、HLA-B多态性SNPs检测的寡核苷酸芯片研究平台,构建HLA标准等位基因库,便于对探针设计、样品制备、杂交条件等各种因素对结果的影响进行评估,利于实验条件的优化.3.2.2 结合HLA序列特点,改进探针设计和阵列排布思想,创新地改进了传统ODN芯片的4L-砌砖法突变检测模式,建立以等Tm值为基础,突变碱基的组合分析模式为主导的探针设计方案.
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