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本研究借鉴单细胞凝胶电泳(singlecellgelelectrophoresis,SCGE)技术以及Southernblotting技术原理建立了特异性地用于检测端粒DNA链断裂损伤的方法。检测结果表明端粒DNA片段经碱性细胞裂解液和碱性溶液变性处理后,可获得最佳的检测效果,灵敏度高、结果可靠,并可用于端粒DNA损伤和修复的评价。
研究表明,端粒酶可能不参与端粒DNA损伤的修复,而DNA依赖性的蛋白激酶(DNA-dependenceproteinkinase,DNA-PK)抑制剂-渥曼青霉素(wortmannin,WM)和聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)抑制剂-3-氨基苯酰胺(3-aminobenzamide,3-AB)能够增强端粒DNA链断裂作用的结果提示PARP与DNA-PK在端粒DNA损伤修复机制中起作用;高浓度的EGCG(>50μM)以剂量依赖方式诱导端粒DNA链断裂片段的形成,EGCG诱导HeLa细胞端粒DNA片段形成是通过诱导细胞内活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)生成介导的,EGCG诱导癌细胞(HeLa细胞)端粒DNA链断裂的作用在正常成纤维细胞(MRC-5细胞)中并不存在,这一差异可能与EGCG诱导癌细胞凋亡但不能诱导正常细胞凋亡的作用存在某种内在的联系。