猪轮状病毒OSU强毒株vp7基因的克隆及其抗原表位原核表达和免疫学活性分析

来源 :中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong523
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的vp7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-VP7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的表达引物进行PCR扩增得到含有VP7中和抗原表位区域639bp的基因片段,定向克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经酶切PCR鉴定的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(终浓度为1.0mmol/mL)37℃诱导4h后,SDS-PAGE电泳显示表达了大小约50ku带GST标签的融合蛋白,薄层扫描显示表达蛋白量占菌体总蛋白的33.2%。Western blot分析表明该VP7重组蛋白可与PRV阳性血清特异性反应。
其他文献
本研究应用二对特异性引物同时检测四环素耐药基因TetB和TetC。通过对35株沙门氏菌分离株的四环素耐药性检测,表明所有沙门氏菌分离株均含TetC基因,与药敏试验结果阳性符合率65
会议
火龙果又名神龙果,为仙人掌科三角柱属多年生热带植物。原产于南美洲。为了实现南果北栽,我们自2002年引种该果,经过试验,克服了前期高温、干旱,后期阴雨不晴等恶劣气候条件
本研究将我国H7亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)的HA基因克隆到质粒pSY538上,把含有禽痘病毒启动子P11的LacZ基因亚克隆到质粒pSY538-HA7的SmaⅠ位点,然后切下
会议
高致病性禽流感是严重危害养禽业健康发展的烈性传染病。免疫是防治高致病性禽流感的最重要手段之一,并且也取得了很显著的防治效果。但是由于禽流感病毒生存环境的压力不断加
会议
高致病性猪蓝耳病对养猪业的危害十分严重。怎样才能把病确实控制住,不仅是生猪饲养者也是各级兽医工作者和科研院所科学家们共同面对的难题,本文介绍了作者于2007年9至10月指
会议
将EIAV驴白细胞弱毒疫苗株在驴胎皮肤细胞中连续传代,分别提取第13、18、21、23、26代病毒培养物的前病毒DNA,以LTR特异性引物PCR扩增前病毒LTR,并进行克隆及测序分析。与本实验
会议
本研究中,我们使用PCR方法,对FDDV感染的FDD细胞中前病毒DNA的env进行了扩增,将PCR产物进行T-A克隆,挑取,阳性克隆用于序列分析。结果表明,,在囊膜蛋白穿膜亚单位TM对应的gp45基因区
会议
参考GenBank中发表PRV OSU毒株VP6序列ORF两端保守区,设计1对特异引物,以PRVJS株反转录cDNA为模板,通过PCR方法获得约113kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序
会议
参考GenBank登录的猪肺炎支原体(Mhp)P46基因序列,利用Primer 5.0软件设计合成引物,通过重叠延伸PC(SOE-PCR)对猪肺炎支原体P46基因的3个位点进行定点突变,将此突变基因插入到表
会议
从猪肺炎支原体基因组中扩增其黏附因子P97C末端基因,然后通过KpnⅠ和SalⅠ酶切位点把该基因克隆入经过同样双酶切的穿梭载体pShuttle-CMV中。将鉴定正确的的重组穿梭质粒经Pm
会议