【摘 要】
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本研究将我国H7亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)的HA基因克隆到质粒pSY538上，把含有禽痘病毒启动子P11的LacZ基因亚克隆到质粒pSY538-HA7的SmaⅠ位点，然后切下
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；新疆农业大学 动物医学院，新疆 乌鲁木齐 830052
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
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本研究将我国H7亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)的HA基因克隆到质粒pSY538上，把含有禽痘病毒启动子P11的LacZ基因亚克隆到质粒pSY538-HA7的SmaⅠ位点，然后切下同时含有HA和LacZ基因的片段再克隆到禽痘病毒载体pSY681的NotⅠ位点，构建出禽痘病毒转移载体pSY681-HA7-LacZ，将此重组质粒与亲本禽痘病毒S-FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞，通过加入X-gal进行数轮重组病毒的筛选、纯化，获得一株重组病毒rFPV-H7HB，PCR和Western blot鉴定结果表明重组鸡痘病毒可以稳定表达HA蛋白。分别用106PFU、104PFU、102PFU剂量的重组病毒rFPV-H7HB经翅膀刺种途径接种免疫4周龄SPF鸡，免疫3周后分别用100LD50的HPAIVA/FPV/Rostock/34(H7N1)鼻腔途径进行攻击。结果，不同剂量的重组病毒免疫后均可诱导出较高水平的HI抗体，并可完全抵抗H7N1毒株的致死性攻击，而非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。结果表明，稳定高效表达我国H7亚型禽流感分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)HA基因的重组禽痘病毒rFPV-H7HB可为我国H7亚型高致病性禽流感的防制提供必要和有效的物质技术储备。
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