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目的:建立血清中乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus)的SYBRgreen荧光定量PCR检测方法。
方法:将克隆的HBV S区基因片段插入到pMDl8-T载体中构建参比品,运用SYBR green实时荧光定量PCR法对系列稀释的参比品进行PCR分析,评价其扩增灵敏度和特异度。
结果:建立的SYBR green实时荧光定量PCR技术检测HBVDNA灵敏度可达10拷贝,扩增结果稳定可靠。CT值(C代表cycle,T代表threshold;值指荧光信号达到设定的阈值所经历的循环数)与起始模板浓度存在良好的线性关系,相关系数为0.996。
结论:成功地建立血清中HBV DNA一步法检测方法,为血清中HBV核酸定量和毒株分型奠定基础。