【摘 要】
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目的:探讨机械牵拉刺激对真皮成纤维细胞胶原合成的直接影响.方法:自人包皮组织建立原代真皮成纤维细胞培养;将培养的成纤维细胞接种至Falcon细胞培养小室(美国BD公司,货号35
【机 构】
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武汉大学人民医院皮肤性病科,湖北 武汉,430060
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目的:探讨机械牵拉刺激对真皮成纤维细胞胶原合成的直接影响.方法:自人包皮组织建立原代真皮成纤维细胞培养;将培养的成纤维细胞接种至Falcon细胞培养小室(美国BD公司,货号353092),培养小室底部聚乙烯对苯二甲酸酯(polyethylene terephthalate,PET)膜含有直径3μm的小孔,待成纤维细胞生长至融合,通过重力加压致使PET膜变形,借以机械牵拉PET膜表面附着生长的成纤维细胞.用倒置显微镜观察机械牵拉后成纤维细胞形态学改变;用实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白印迹技术检测机械牵拉对成纤维细胞的Ⅰ型胶原蛋白(COL1A),基质金属蛋白酶-1 (MMP1),组织基质金属蛋白酶抑制剂-1 (TIMP1),α2整合素(ITGA2)和α平滑肌肌动蛋白(ACTA2)5种基因mRNA及其蛋白表达的影响.结果:机械牵拉组细胞被拉长呈细长梭形,细胞长轴沿应力方向排列,而未牵拉对照组细胞呈梭形,排列无序散乱;qPCR结果显示机械牵拉组细胞COL1A,TIMP1,ITGA2和ACTA2基因mRNA表达增加,分别为未牵拉对照组的1.43、1.83、1.62、2.18倍(P＜0.05),而MMP1基因表达无明显变化(P＞0.05);蛋白印迹结果显示5种蛋白表达改变与其基因mRNA表达一致.结论:机械牵拉刺激能改变真皮胶原蛋白合成-降解平衡,增加Ⅰ型胶原蛋白的从头合成.
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