赤芍801对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 NF-κB 表达的影响

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【目的】探讨赤芍801作用后的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis ,RA )患者成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes ,FLS)p65和p50蛋白在细胞内定位及表达变化。【方法】RA患者关节滑液经原代培养分离出FLS ,分别用浓度为64μg/mL、4μg/mL和0μg/mL的赤芍801作用24 h后,先采用细胞免疫化学方法对p65和p50在细胞内表达定位进行分析,再提取核蛋白,采用Western blotting检测p65和p50的表达。【结果】细胞免疫化学结果表明0μg/mL赤芍801刺激时p65和p50蛋白主要表达于RA患者FLS细胞浆中;与对照组相比,4μg/m L赤芍801浓度刺激24 h后,p65和p50表达无变化( P >0.05),而64μg/m L赤芍刺激24 h后,p65和p50在细胞核中的表达明显上升,与对照组相比差异有统计学意义( P <0.05)。Western blotting结果表明,p65和p50均在RA患者 FLS核蛋白抽提物中被检出,与对照组相比,在4μg/m L赤芍801刺激24 h对p65和p50表达无影响( P >0.05);当赤芍801浓度增加到64μg/m L时,p65和p50表达显著增加( P <0.05)。【结论】赤芍801可调节RA患者FLS p65和p50从细胞质向细胞核转移,并诱导其表达上调。“,”[Objective] To explore the location and expression changes of p65 and p50 protein in fibroblast-like synoviocyte(FLS) in patients with rheumatoid arthritis (RA) after Radix paeoniae rubra 801(P801) treat-ment .[Methods] FLS was isolated from synovial fluid through primary culture ,and then treated with 64 ,4 and 0μg/mL P801 for 24h .Immunocytochemistry method was used to analyze the location of p 65 and p50 in cells ,and then nuclear protein was drawn .Western blotting was used to detect the expression of p65 and p50 .[Results] Immunocytochemistry showed that the p65 and p50 were mainly expressed in cytoplasm of RA FLS treated by 0μg/mL P8010 .Compared with control group ,the expression of p65 or p50 had no change 24h af-ter 4μg/mL P801 treatment( P >0 .05) .The expression of p65 and p50 in nucleus 24h after 64μg/mL P801 treatment ,and there was significant difference between treatment group and control group ( P0 .05) .When the concentration of P801 reached 64μg/mL ,the expression of p65 and p50 increased signifi-cantly( P<0 .05) .[Conclusion]P801 can regulate the migration of p65 and p50 of RA FLS from cytoplasm to cell nuclear ,and induce their up-regulation .
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