【摘 要】
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毛细管电泳(CE)具有高分辨、快速分离、样品用量小和无需固相介质等优点,是高效筛选核酸适配体的方法之一.然而,由于CE的进样量少,有限的核酸库容量是否影响毛细管电泳-指数
【机 构】
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北京理工大学生命学院,“分子医学与生物诊疗”工业和信息化部重点实验室,北京100081
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毛细管电泳(CE)具有高分辨、快速分离、样品用量小和无需固相介质等优点,是高效筛选核酸适配体的方法之一.然而,由于CE的进样量少,有限的核酸库容量是否影响毛细管电泳-指数富集配体系统进化(CE-SELEX)适配体的筛选效率,尚不明确.本研究以神经元特异性烯醇化酶(NSE)为模式蛋白,考察了CE筛选中核酸库容量对筛选效率的影响,以明确CE-SELEX方法的有效性.分别使用4个浓度(0.1、1、10和100 μmol/L)的初始核酸库进行适配体筛选,比较了初始库与经3轮筛选后的次级核酸库的亲和力.结果 表明,4个核酸库筛选轮次间库亲和力相近,且经2轮筛选后均得到了微摩尔级别的核酸适配体.此外,用高浓度核酸库筛选获得的序列更具多样性,但未能提升候选序列亲和力.经2轮筛选得到NSE的核酸适配体Seq qN-01,其与NSE复合物的解离常数(KD)为(4.72±0.15)μmol/L,并表现出很好的特异性.综上,核酸库容量会提高后续富集库的序列多样性,但对适配体筛选效率没有显著影响.
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