【摘 要】
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目的建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法.方法根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt236N)P
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目的建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法.方法根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt236N)PCR产物中含有DraⅠ酶切位点(5TTTAAA3),而变异株(rt236T)无此限制性酶切位点.选取4份应用ADV治疗1年以上出现HBV DNA反跳的临床耐药慢性乙型肝炎患者血清,经PCR扩增、DraⅠ酶切、3%琼脂糖凝胶电泳,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析.并选择经该方法鉴定的野生株及变异株各1例进行HBV RT区基因序列分析.结果自4份血清标本中检测到1例rtN236T变异.所建立的ntPCR-RFLP方法灵敏度高,可以检测到103copies/L的HBV DNA;特异性强,其RFLP分析结果与DNA测序结果一致.结论应用ntPCR-RFLP方法检测rtN236T变异具有灵敏、特异、简便的优点,适用于ADV耐药变异的临床监测工作.
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