【摘 要】
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目的研究载体表达的短发夹状双链RNA(shRNA)对丙型肝炎病毒(HCV)IRES介导的基因表达的特异性抑制作用.方法构建HCV IRES调控的绿色荧光蛋白表达载体(pIRES-GFP)和虫荧光素酶
【机 构】
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重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部感染性疾病分子生物学重点实验室,河南平顶山工学院
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目的研究载体表达的短发夹状双链RNA(shRNA)对丙型肝炎病毒(HCV)IRES介导的基因表达的特异性抑制作用.方法构建HCV IRES调控的绿色荧光蛋白表达载体(pIRES-GFP)和虫荧光素酶表达载体(p5′UTR-Luc),以及针对HCV IRES的shRNA表达载体(pshRNA-HCV),共转染HepG2细胞,于转染后24、48、72 h观察绿色荧光的强弱,用Western blot检测绿色荧光蛋白的表达,半定量逆转录聚合酶链反应法检测GFP的mRNA水平,双荧光素酶系统检测虫荧光素酶活性.结果pshRNA-HCV作用组绿色荧光强度明显弱于未干扰组,GFP蛋白表达量及虫荧光素酶活性降低60%～70%,半定量逆转录聚合酶链反应显示pshRNA-HCV导致了GFP基因mRNA水平的降低.结论针对HCV IRES的shRNA能够显著和特异地抑制该区域调控的蛋白表达水平及mRNA水平,该研究结果为利用RNA干扰技术治疗HCV感染进行了初步探索.
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