【摘 要】
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目的:探讨小GTP酶Rac1(Rac family small GTPase 1,RAC1)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及机制.方法:构建pLKO.1-puro RAC1 shRNA载体,包装慢病毒,感染卵巢癌细胞OVCAR3和SKOV
【机 构】
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江苏大学医学院,江苏 镇江212013;江苏大学附属徐州医院妇产科,江苏 徐州221005;江苏省检验医学重点实验室,江苏 镇江212013
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目的:探讨小GTP酶Rac1(Rac family small GTPase 1,RAC1)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及机制.方法:构建pLKO.1-puro RAC1 shRNA载体,包装慢病毒,感染卵巢癌细胞OVCAR3和SKOV3,并采用嘌呤霉素筛选;通过蛋白质印迹、细胞划痕和基质胶侵袭实验分别检测细胞中RAC1敲减效率,细胞迁移和侵袭能力的改变;采用蛋白质印迹和免疫荧光染色观察细胞中紧密连接蛋白1(tight junction protein 1,TJP1)的表达和分布变化.结果:酶切电泳和测序结果均显示pLKO.1-puro RAC1 shRNA慢病毒载体构建成功,蛋白质印迹结果证实感染RAC1 shR-NA慢病毒的OVCAR3和SKOV3细胞中RAC1蛋白水平较对照组明显下降(P<0.05).细胞划痕和基质胶侵袭实验证实,RAC1敲减后卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力较对照组显著下降(P均0.05),但免疫荧光染色表明TJP1由胞质内散在分布转变为细胞间连接处聚集分布,细胞间连接更加紧密.结论:RAC1基因可能通过改变TJP1蛋白分布从而影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭.
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