HIV-1整合酶的纯化及活性检测

来源 :中国药科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zm4910588
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含整合酶基因的重组质粒 pET p31在E coliBL2 1(DE3)中以包含体形式高效表达HIV 1整合酶 (p31蛋白 )。初步纯化的包含体用 8mol/L尿素变性溶解 ,经阳离子交换剂柱层析和分子筛柱层析纯化 ,并通过梯度透析的复性过程去除尿素 ,获得可溶性及高纯度 p31。测定证实 ,复性后的 p31蛋白呈现良好的 3′加工、链转移及去整合活性 The recombinant plasmid pET p31 containing the integrase gene highly expressed HIV 1 integrase (p31 protein) as inclusion bodies in E. coli BL21 (DE3). The initially purified inclusion bodies were denatured with 8 mol / L urea, purified by cation exchange column chromatography and molecular sieve column chromatography, and urea was removed by renaturation by gradient dialysis to obtain soluble and highly purified p31. The assay confirmed that the annealed p31 protein showed good 3 ’processing, strand transfer and de-integrative activity
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