【摘 要】
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研究旨在建立一种检测鸡Ⅱ型星状病毒(CAstV)绝对定量的检测方法.采用PCR方法扩增Ⅱ型CAstV保守区域基因RdRp部分基因,将其克隆至pGEM-T载体作为阳性标准质粒,并根据获得的Rd
【机 构】
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扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室,江苏扬州225009;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;扬州大学
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研究旨在建立一种检测鸡Ⅱ型星状病毒(CAstV)绝对定量的检测方法.采用PCR方法扩增Ⅱ型CAstV保守区域基因RdRp部分基因,将其克隆至pGEM-T载体作为阳性标准质粒,并根据获得的RdRp基因设计合成一对133 bp引物,成功建立了Ⅱ型CAstV的绝对定量real-time PCR的检测方法.结果显示:研究构建的检测方法线性关系良好,检测灵敏度为10 copies/μL,且对常见的禽源病毒均无非特异性扩增,特异性好.应用建立的绝对定量real-time PCR检测了病毒感染1日龄雏鸡不同组织样品,掌握了鸡Ⅱ型星状病毒在鸡体内不同组织内的分布及增殖情况.试验成功建立了Ⅱ型CAstV绝对定量real-time PCR检测方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为进一步深入研究Ⅱ型CAstV的生物学特性提供了检测手段.
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