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我们以前曾报道，表达单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D（HSV-2gD）的重组痘苗病毒（实验疫苗株）能保护被免疫小鼠抵抗致死量HSV-2病毒的攻击。在此工作基础上，严格按人用疫苗研究要求的实验条件，成功地建立了表达HSV-2gD的重组痘苗病毒活疫苗株。首先将经聚合酶链反应（PCR）修饰的HSV-2gD基因插入痘苗表达质粒pJSB1175，置于痘苗病毒P7.5K早／晚期启动子控制下。将此重组质粒用Lipofectin方法转染已受野型TK+痘苗病毒天坛761株感染的人胚肺二倍体细胞。经同位素探针（32P-HSV-2gD）原位杂交法和3轮蚀斑纯化，筛选出基因组内整合有HSV-2gD基因的重组痘苗病毒。斑点和Southern杂交证实，HSV-2gD基因已插入痘苗病毒基因组内预期的TK区段，间接免疫荧光检测显示，重组病毒感染细胞后能有效地表达HSV-2gD蛋白。