【摘 要】
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以梅花鹿为研究对象,通过流式细胞术、荧光定量PCR等方法,探讨YAP(Yes-associated protein,即Yes相关蛋白)对鹿茸间充质细胞增殖与分化的影响.分离培养鹿茸间充质细胞,添加一
【机 构】
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吉林大学动物医学学院,吉林长春130062
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以梅花鹿为研究对象,通过流式细胞术、荧光定量PCR等方法,探讨YAP(Yes-associated protein,即Yes相关蛋白)对鹿茸间充质细胞增殖与分化的影响.分离培养鹿茸间充质细胞,添加一定浓度的YAP抑制剂Verteporfin后,通过流式细胞术检测发现,细胞的增殖活性被显著抑制,G0/G1期细胞百分比增加,S期细胞百分比降低.同时,Verteporfin 可降低CCND1、CCND2、CCND3、CCNE1、CDK2、CDK4和CDK6在鹿茸间充质细胞中的表达.Verte-porfin 处理12,24,36,48,72 h后,软骨细胞标志性分子COLⅡ、SOX9和AGC的表达显著增强.进一步研究了YAP对间充质细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的影响,结果显示Verteporfin可增加间充质细胞中ROS含量,促使细胞中超氧阴离子(O2-)和线粒体ROS(mtROS)含量升高.为了探究YAP是否通过ROS来影响鹿茸间充质细胞的分化,细胞经Verteporfin处理2h后再添加抗氧化剂GSH和NAC处理24 h,结果显示GSH和NAC可显著减低Verteporfin对COL Ⅱ、SOX9和AGC mRNA的诱导效应.结果表明,YAP在鹿茸间充质细胞的增殖与分化过程中起重要作用.
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