【摘 要】
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目的:本实验设计合成靶向NF-kB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对肾小球系膜细胞TNF-α表达的抑制效应.方法:以NF-kB顺式作用元件kB序列为模板,设计包含两个拷贝的kB序列,长度为58
【机 构】
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第三军医大学附属大坪医院肾内科,重庆,400042第三军医大学野战外科研究所一室;
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目的:本实验设计合成靶向NF-kB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对肾小球系膜细胞TNF-α表达的抑制效应.方法:以NF-kB顺式作用元件kB序列为模板,设计包含两个拷贝的kB序列,长度为58个碱基的环状ODNs,合成后部分序列做FAM标记,行转染效率鉴定实验.提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组.采用阳离子脂质体将2、4、8 mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6h后用LPS刺激,收集转染后8、12、18上清和细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清TNF-α蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测TNF-amRNA转录.结果:阳离子脂质体可将哑铃形圈套ODNs高效转染入肾小球系膜细胞;4、8mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞TNF-α转录和表达.结论:靶向NF-kB的哑铃形圈套ODNs对体外培养的肾小球系膜细胞炎性因子TNF-α的表达具有抑制效应.
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