含凝血酶识别位点的重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子在大肠杆菌的表达

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采用PCR技术,从细胞中获取粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子cDNA,并在5′端设计上凝血酸酶切位点、5个组氨酸密码子、起始密码子及EcoR1酶切位点,在3′端设计上BamH1酶切位点。将扩增产物酶切后克隆到pBV220质粒的EcoRⅠ-BamHⅠ酶切位点,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子(pGM09/DH5α)。在E.coli中获高效表达,表达量占总蛋白的31.2%,生物活性为1.1×107U/L发酵液,纯化工艺简化。 The PCR technique was used to obtain the granulocyte / macrophage colony stimulating factor cDNA from the cell, and the 5 ’end of the clotting site, 5 histidine codons, start codon and EcoR1 cleavage site Point, BamH1 restriction site was designed on the 3 ’end. The amplified product was digested and cloned into pBV220 plasmid EcoR Ⅰ-BamH Ⅰ restriction sites, transformed into E. coli DH5α, positive clones screened (pGM09 / DH5α). It was highly expressed in E.coli, accounting for 31.2% of the total protein. The biological activity was 1.1 × 107U / L, and the purification process was simplified.
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