脱细胞软骨基质对于大鼠腰椎终板软骨干细胞分化的影响

来源 :中国矫形外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaominjie88
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[目的]制备家猪脱细胞软骨基质,探索其对大鼠腰椎终板软骨干细胞分化的影响。[方法]通过胰酶、核酶及Triton X-100制备脱细胞软骨基质,将软骨基质溶于双蒸水制得脱细胞软骨基质膜。将大鼠腰椎终板软骨干细胞种植于基质膜上,CCK-8检测1、3、5 d的增殖情况,并与空白板对照。取P3代终板软骨干细胞种植于铺有软骨基质的孔板(DEPM组)和两组空白板(正常诱导组和无诱导组),然后进行成骨、成脂肪及成软骨分化诱导,2周后,茜素红、油红O及番红染色,分别鉴定其成骨、成脂肪及成软骨能力;每组取4孔按500 ul/孔加入DMSO,置于酶标仪上,在450 nm波长下检测各组的吸光度。同时Real-Time PCR分别检测成骨、成脂肪及成软骨特征性基因Runx2、Col-2a1和PPAR?在各组中的相对表达量,分析干细胞在软骨基质上的分化倾向性。[结果]大鼠腰椎终板软骨干细胞能够在脱细胞软骨基质上生长,并与其有很好的组织相容性。将终板软骨干细胞进行诱导后染色发现,DEPM组的干细胞具有更强的成骨分化能力,较低的成脂肪及成软骨分化能力。Real-Time PCR检测成骨基因Runx2在DEPM组较其他两组呈较高表达,而Col-2a1和PPAR?基因表达较低。在450 nm波长下,DEPM组中的成骨吸光度最大,大于其他两组,成脂肪及成软骨的吸光度小于正常诱导组。[结论]脱细胞软骨基质能够较好的保持干细胞成脂肪及成软骨的分化特性,但是促进干细胞向成骨方向分化。
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