【摘 要】
：
建立一种简单、高效的从混合斑中鉴定和分离精子的方法是法医学急需解决的难题之一.针对精细胞膜表面特定蛋白质开发的核酸适配体系统,可用于混合斑中精子的分离纯化.人载脂蛋白6 (hLCN6)是一种附睾分泌蛋白质,它能结合到精子的头部和尾部,与精子成熟有关.利用指数富集配基的系统进化技术,以hLCN6蛋白为靶标,从96 nt单链DNA随机文库中筛选出与hL-CN6高亲和力和特异性结合的适配体.经15轮正向筛选和3轮反向筛选.通过测序分析,采用酶联寡核苷酸吸附实验、斑点印迹和细胞免疫荧光染色等方法检测,获得的核酸适
【机 构】
：
河南科技大学法医学院,河南,洛阳471023;中信重工机械股份有限公司,河南,洛阳471003
论文部分内容阅读
建立一种简单、高效的从混合斑中鉴定和分离精子的方法是法医学急需解决的难题之一.针对精细胞膜表面特定蛋白质开发的核酸适配体系统,可用于混合斑中精子的分离纯化.人载脂蛋白6 (hLCN6)是一种附睾分泌蛋白质,它能结合到精子的头部和尾部,与精子成熟有关.利用指数富集配基的系统进化技术,以hLCN6蛋白为靶标,从96 nt单链DNA随机文库中筛选出与hL-CN6高亲和力和特异性结合的适配体.经15轮正向筛选和3轮反向筛选.通过测序分析,采用酶联寡核苷酸吸附实验、斑点印迹和细胞免疫荧光染色等方法检测,获得的核酸适配体H2可特异性识别并结合hLCN6蛋白.hLCN6解离常数(Kd)为(3.21±0.75) nmol/L,且适配体H2在体外表现出与人精子较高的亲和力与特异性.这为依据核酸-蛋白质相互作用分离混合斑中的精细胞奠定了理论基础,提供了新思路.
其他文献
小整合频率1(petite integration frequency 1,PIF1)解旋酶广泛存在于生物体内,在核酸的代谢过程中发挥着重要作用.近年来,人们已经报道了多种PIF1解旋酶的生化活性及三维结构,但对极端环境下细菌的PIF1解旋酶的报道仍较少.本文利用多种生物化学与生物物理学技术,对黄石热脱硫弧菌PIF1(Ty.PIF1)解旋酶进行了多方面研究.通过原核表达纯化系统,获得了纯度90％以上,均一性好的Ty.PIF1蛋白.Ty.PIF1在溶液中为单体,分子量约为60 kD.Ty.PIF1具有很高的
蛋白质药物因其独特的优势,在疾病的预防和治疗中发挥了极其重要的作用,但大分子的特性阻碍了其对细胞内靶标的作用.现有的递送策略中,由于穿膜肽更适用于临床研究和治疗,逐渐成为了递送蛋白质药物最主要的工具.因此,开发安全有效的穿膜肽类递送载体对于生物医药的基础研究及临床应用具有重要意义.文中设计了一种基于肠毒素A2结构域的自释放型细胞内运输载体LCA2,该载体由连接子Linker、自释放酶敏感位点Cs与穿膜结构域LTA2三部分组成,并以荧光蛋白质mCherry为模式蛋白质来检测该载体的性质.电泳结果显示,从含有
分化的体细胞可通过体外过表达多能性相关的转录因子重编程为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs).体细胞重编程的过程需要细胞内各个转录因子相互作用,协同调控细胞命运的转变.同源异形框D12(homeobox D 12,Hoxd12)是调控脊椎动物胚胎发育的关键转录因子之一,对足趾发育、体轴形成和细胞内信号转导具有重要作用.但Hoxd12关于体细胞重编程和胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)方面的研究未见报道.本研究首先以7因子(
已有研究证实,microRNA (miRNAs)通过调控多种基因参与肿瘤的发生和发展过程.然而,miR-654-5p通过调控宿主细胞因子1(host cell factor 1,HCFC1)抑制乳腺癌细胞侵袭转移的分子机制尚不清楚.本研究通过生物信息学数据库分析发现,miR-654-5p在乳腺癌组织中低表达,且低表达病人愈后较差(P=0.013),实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测表明,miR-654-5p在MDA-MB-231细胞中表达降低(P
肌动蛋白样6A(actin-like 6A,ACTL6A),又被称为BAF53A,是组成染色质重构复合体SWI/SNF亚基之一,在细胞干性维持中发挥关键作用.近期研究发现,ACTL6A在肿瘤发生发展中起重要作用,但ACTL6A在顺铂耐药中的功能尚不明确.本文探讨了ACTL6A在肺腺癌细胞干性维持及顺铂耐药中的生物学功能和分子机制.首先,通过TCGA、GEO和GEPIA数据库分析发现,ACTL6A在肺腺癌组织及顺铂耐药细胞中高表达(P＜0.05),且其高表达与肺腺癌患者的不良预后正相关.细胞生物学结果显示,
慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是造成肝癌的主要原因,消除病毒基因组中稳定的共价闭合环状DNA (cccDNA)是乙肝治疗的主要难点.HBV cccDNA的形成需要填充单链区域和闭合松弛环状DNA (rcDNA).我们之前已报道,增殖细胞核抗原(PCNA)参与了HBV cccDNA的形成.然而,HBV rcDNA向cccDNA转化的分子机制尚不清楚.本研究旨在探讨PCNA参与从HBV rcDNA到HBV cccDNA的转化过程的分子机制.结果 显示,CRISPR/Cas9系统敲除PCNA能显著阻止HBV r
环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一类新型的长非编码RNA,已有研究表明circRNAs可调控肿瘤的发生发展.本研究首先通过高通量测序技术检测5对结直肠癌组织及其配对的癌旁正常组织中的circRNAs差异表达谱,鉴定出477种差异表达的circRNAs,其中252种表达上调,225种表达下调,选取表达上调最为显著的circRNA——circPVT1 (circRNA plasmacytoma variant translocation 1,circPVT1),利用实时荧光定量PC
人类免疫缺陷病毒反式激活因子(human immunodeficiency virus transactivator,TAT)蛋白质转导肽是HIV-1编码的反式转录激活因子,富含碱性氨基酸序列,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,例如细胞质膜和血脑屏障等.金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质,在维持生物体内金属含量动态平衡、重金属解毒以及防御氧化应激中均发挥重要作用.本研究通过基因重组技术制备由TAT介导的能跨膜进入细胞的重组融合蛋白质TAT-
专业课程教学融合思想政治教育是当前教学改革的新理念.在生物学类专业的核心课程“生物化学”中如何巧妙地融合思政是教学研究的重点.教材是保证教学质量的重要因素和课程改革成果的体现.本文以生物化学经典教材为载体,归纳出“辩证思维和辩证唯物主义”、“科学发展观和社会主义核心价值观”、“探索精神、求真务实的科学精神、民族自豪感”、“集体主义精神和爱岗敬业精神”等维度的丰富的思政教学元素,通过“课前、课中、课后”三位一体的培养模式,结合教学实践和教学效果,探索了该课程在思政改革背景下的教学方法与教学策略,旨在实现“教
内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)与帕金森病(Parkinson\'s disease,PD)发展进程密切相关.Apelin是已被证实具有明显神经保护作用的内源性多肽,但其保护机制尚不清楚.该研究探讨Apelin-17降低1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)对SH-SY5Y细胞凋亡的分子机制.实时无标记动态细胞分析(real time cell analysis,RTCA)实验数据表明,0.1μmol/L Apelin-17预处理2h,Mpp+诱导的SH-SY