【摘 要】
：
小整合频率1(petite integration frequency 1,PIF1)解旋酶广泛存在于生物体内,在核酸的代谢过程中发挥着重要作用.近年来,人们已经报道了多种PIF1解旋酶的生化活性及三维结构,但对极端环境下细菌的PIF1解旋酶的报道仍较少.本文利用多种生物化学与生物物理学技术,对黄石热脱硫弧菌PIF1(Ty.PIF1)解旋酶进行了多方面研究.通过原核表达纯化系统,获得了纯度90％以上,均一性好的Ty.PIF1蛋白.Ty.PIF1在溶液中为单体,分子量约为60 kD.Ty.PIF1具有很高的
【机 构】
：
西北农林科技大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室,陕西杨凌712100
论文部分内容阅读
小整合频率1(petite integration frequency 1,PIF1)解旋酶广泛存在于生物体内,在核酸的代谢过程中发挥着重要作用.近年来,人们已经报道了多种PIF1解旋酶的生化活性及三维结构,但对极端环境下细菌的PIF1解旋酶的报道仍较少.本文利用多种生物化学与生物物理学技术,对黄石热脱硫弧菌PIF1(Ty.PIF1)解旋酶进行了多方面研究.通过原核表达纯化系统,获得了纯度90％以上,均一性好的Ty.PIF1蛋白.Ty.PIF1在溶液中为单体,分子量约为60 kD.Ty.PIF1具有很高的热稳定性,在65℃以下时,二级结构保持稳定,大于70℃时,二级结构才会发生改变.Ty.PIF1在体外最适解旋温度为45℃,并非黄石热脱硫弧菌生存的最适温度,预示着Ty.PIF1在体内发挥活性时,可能需要其他辅助因子的参与.Ty.PIF1的酶活力温度范围较宽,在20 ～ 55℃均具有解旋活性,在55℃能解旋预示了Ty.PIF1具有耐热特性.Ty.PIF1偏向于同含有单链的底物结合,但对单链长度有一定要求,其长度至少大于4 nt;Ty.PIF1也会较好地结合无单链尾链的G4结构,说明Ty.PIF1可能有专门结合G4结构的区域.Ty.PIF1能解开一系列带有5\'-单链尾链的类似于复制中间体的底物,且对底物结构有一定的偏好性;Ty.PIF1也可以解开含有G4结构的底物,DNA-RNA杂交链、RNA-loop结构,预示着Ty.PIF1在生物体内有着多种生物学功能.Ty.PIF1解旋带有不同长度5\'-单链尾链的双链底物时,尾链长度越长,解旋速率越快,预示着Ty.PIF1可能与Sc.PIF1一样有着较低的解旋持续性.本文将Ty.PIF1的生化活性与其它物种的PIF1解旋酶进行了比较,找出了其中的共性与差异,加深了人们对嗜热菌PIF1解旋酶的认识,为今后研究其它极端环境微生物的PIF1解旋酶提供了一些思路.
其他文献
新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)肆虐全球,由于缺乏有效的疫苗及抗病毒疗法,多国医疗卫生系统面临着沉重的压力.COVID-19在人体内主要通过血管紧张素转换酶-2(angiotensin converting enzyme-2,ACE-2)作用,故ACE-2是严重急性呼吸综合征冠状病毒2型进入宿主细胞的关键受体,而脂肪组织中ACE-2的表达水平高于肺组织,可能增加肥胖病人对该病毒的易感性.肥胖相关的慢性低度炎症、维生素D缺乏及肠道菌群失调会削弱免疫反应
人体是个巨大的生态系统,各个器官的表面附着大量的微生物,微生物群通过与宿主细胞之间的相互作用来保证机体的正常营养代谢和微生态稳定.长期以来由于呼吸道的生理功能和特性,其微生物菌群的调节作用没有引起足够重视.自“肠-肺轴”的提出,更多学者开始致力于研究呼吸道微生态,并发现一些呼吸道疾病如慢性阻塞性肺疾病、特发性肺纤维化以及支气管哮喘等的发生发展与呼吸道微生态存在一定的关系,这为进一步研究呼吸道疾病,并寻求更好的治疗方式提供新的方向和选择.本文就支气管哮喘与呼吸道微生态之间的作用关系作一综述.
自噬是一种常见的细胞代谢过程,其特征是形成具有双层膜结构的自噬体将胞内物质或外来异物包裹,进而与溶酶体融合进行降解.自噬对于维持细胞的稳态至关重要,自噬功能异常与多种疾病的发生发展密切相关.例如肿瘤、神经退行性疾病、病毒感染和免疫疾病等,其可能成为这些疾病潜在的治疗靶点,因此研究自噬的调控是生命科学及医学领域的热点.三结构域蛋白质(tripartite motif-containing proteins,TRIMs)家族是一类具有E3泛素连接酶活性的蛋白质,通常包含3个保守的结构域,即RING锌指结构域、
蛋白质合成是一个复杂的过程.在特定情况下,翻译过程中会发生异常核糖体停滞导致无法有效回收核糖体及翻译的元件,从而影响细胞内正常的转录效率.同时,异常翻译的新生多肽通过积累聚集而扰乱蛋白质稳态环境,进而导致疾病的发生.核糖体翻译质量控制(ribosome associ-ated protein quality control pathway,RQC)为真核细胞核糖体回收、降解错误的新生多肽提供一条拯救途径.最新研究表明,线粒体表面也存在RQC调控,称为线粒体RQC(mitochondrial ribosom
肿瘤抑制蛋白p53作为一种重要的转录因子,参与细胞周期调节、细胞凋亡、细胞衰老以及DNA修复等生物学过程.p53在不同生理条件下发挥相应的功能离不开众多辅因子的协助,这些辅因子可以调节p53的修饰状态、细胞亚定位,以及p53的稳定性等.因此,鉴定p53结合蛋白质对进一步理解p53在体内的信号调控网络具有重要生物学意义.本文利用酵母双杂交实验技术筛选出1个新的p53结合蛋白质,FADD样白细胞介素1β转化酶相关巨蛋白(FADD-like interleu-kin-1β-converting enzyme a
顶空固相微萃取气相色谱-质谱联用技术(headspace-solid phase microextraction/gas chroma-tography-mass spectrometry,HS-SPME/GC-MS)用于分析植物柚皮活性挥发物(botany volatile organ-ic compounds,BVOCs)物质组与β-牛乳球蛋白(bovine β-lactoglobulin,β-LG)相互作用,筛选出药效活性BVOCs物质组.通过定量回收BVOCs的方法,分析β-LG与药效活性BVOC
环状RNA(circRNA)是一类闭合环状结构的新型非编码RNA,广泛分布于各种组织中.与传统的线性RNA相比,circRNA不具有5\'-和3\'-末端,不会轻易被核酸外切酶降解,能够稳定存在于多种体液且进化保守,目前已成为临床非编码RNA的重点研究对象.恶性肿瘤具有发现晚、进展快、易复发等特点,目前尚缺乏有效的治疗方式,其发病率和死亡率一直居高不下.如何对其进行早期诊断、治疗干预以及预后评估,是当代医学研究的重点和热点之一.CDR1as是研究最为广泛的circRNA.它能够通过海绵微RNA (
骨骼肌是人和家畜重要的组织,骨骼肌发育调控机制的研究对于肌肉疾病的诊断治疗和家畜肉质改善具有重要意义.骨骼肌发育受MyoD、Myf5、Mrf4和Mef2等因子以及AKT/mTOR、p38/MAPK和Wnt/β-catenin等信号通路的调节,此外,lncRNA、miRNA和circRNA等非编码RNA也被陆续证明可以调控骨骼肌发育.但骨骼肌发育调控的详细机制仍存在许多未知.tRNA由76～90个核苷酸组成,主要功能是通过转运氨基酸参与蛋白质的合成,并涉及应激信号转导.此外,在压力应激条件下,tRNA会被多
物质成瘾是一种慢性复发性脑病.成瘾物质诱导脑内神经适应性的改变一定程度上由表观遗传机制介导.DNA甲基化、组蛋白修饰和染色质重塑影响组织或脑内的基因表达永久性改变,最终导致个体行为异常.甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG binding protein 2,MeCP2)作为一种重要的转录抑制因子,其含有的特征性结构域,具有调节染色体构象、转录激活和参与RNA剪切等功能.也已证实,在脑发育过程中,MeCP2在调控神经元可塑性和相关靶基因的转录方面有重要作用,这引起了人们对神经元功能中表观遗传重要性
正常大脑活动需要兴奋性神经元和抑制性神经元的共同作用,而中间神经元被认为是控制大脑过度兴奋性的主要细胞成分.已有研究表明,GABA能中间神经元的缺陷可导致病理性的高兴奋性.大脑皮层中间神经元大多起源于胚胎端脑腹侧,经远距离的切向迁移到达皮层,继而径向迁移到达发育中的皮质层.其中,切向迁移被认为是中间神经元迁移的主要方式.大脑皮层中间神经元的迁移是一个复杂而精确的过程.随着对皮层神经元切向迁移研究的深入,目前已有许多分子被证明在迁移过程中发挥关键的作用.本文主要描述了中间神经元的迁移路径和迁移方式,并从两个