【摘 要】
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通过含有pCAMBIA 1300载体(抗潮霉素基因(hpt)作为选择标记基因)的根癌农杆菌菌株EHA 105的介导,将326个银合欢I型碱性壳多糖酶基因(KB3,GenBank登录号为:AAM49597)的氨基酸
【机 构】
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泰国瓦莱阿隆功皇家师范大学研究生院,泰国巴吞他尼府,12180苏拉哪里理工大学生化学院理学研究所,泰国呵叻府湄宏順市區30000;
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通过含有pCAMBIA 1300载体(抗潮霉素基因(hpt)作为选择标记基因)的根癌农杆菌菌株EHA 105的介导,将326个银合欢I型碱性壳多糖酶基因(KB3,GenBank登录号为:AAM49597)的氨基酸导入到籼稻Khao Dawk Mali 105(KDML 105)植株中,获得了KDML 105籼稻的愈伤组织.pCAMBIA 1300载体包含有CaMV35S 启动子、银合欢壳多糖酶基因和NOS终止子.在NB培养基的水稻秧苗中愈伤组织的转化率为94%.在培养温度为28 ℃,以含有4 mg/l BAP和7 g/l植物凝胶再生培养基的条件下,愈伤组织的再生频率高达80%.为了建立一个KDML 105农杆菌转化方法,考察了各方面的因素.共培养期间,在培养基中添加50 μM的乙酰丁香酮对提高瞬时转化率非常重要. 4周龄的盾片衍生的愈伤组织是最佳的起始材料.添加40 mg/l潮霉素和400 mg/l头孢霉素的NB培养基是水稻愈伤组织选择性转化的最佳培养基,其转化率达到78%.采用PCR、Northern Blot杂交凝胶、Southern Blot杂交凝胶和GUS分析技术研究了愈伤组织和转基因水稻中的壳多糖酶和gus 基因的表达.壳多糖酶和gus 基因在水稻的多个部位被检测到,包括愈伤组织、叶、根、茎和秧苗,但是它们在水稻根部的含量较少.抗真菌的水稻壳多糖酶表现出抗串珠镰刀菌的性质.
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