目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在结缔组织病相关的间质性肺病(CTD-ILD)中的抗纤维化作用及机制.方法 免疫组织化学法检测PPARγ在37例CTD-ILD及20例对照组肺组织中表达.原代培养人肺成纤维细胞,无血清培养12h,加入转化生长因子(TGF)-β1(5 ng/ml)和(或)PPARγ的配体罗格列酮(0、1、5、10、20及40 μmol/L),继续培养,蛋白印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,免疫共沉淀-免疫印迹法检测乙酰化Smad3水平及Smad3和PPARγ与P300结合情况变化.采用t检验,单因素方差分析或Mann-Whitney秩和检验进行分析.结果 PPARγ在CTD-ILD肺组织中阳性表达面积百分比明显低于对照组[分别为0.92％(1.44％),3.50％(1.94％)；Z=-8.924,P＜0.01].细胞经TGF-β1(5 ng/ml)诱导后与空白组相比,α-SMA表达量增加(分别为0.836±0.063,0.487±0.114；P＜0.05)；罗格列酮(0、1、5、10、20及40 μmol/L)干预48 h后α-SMA相对表达量分别为0.918±0.062,0.852±0.042,0.725±0.057,0.678±0.042,0.418±0.022,0.456±0.029;5、10、20、40 μmol/L组与0μmol/L组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).PPARγ抑制剂GW9662(10 μmol/L)能部分取消PPARγ的抑制效应(0.946±0.087,0.538±0.120;P＜0.01).肺成纤维细胞经TGF-β1诱导60、90、180 min后与对照组相比,乙酰化Smad3表达增加(分别为0.565±0.047,1.127±0.101,0.873±0.022,0.614±0.407;P＜0.05).细胞在TGF-β1和(或)罗格列酮诱导下培养90 min,TGF-β1组与空白对照组相比Smad3与P300结合相对增加(1.46±0.12,0.98±0.09;P＜0.05);罗格列酮+TGF-β1组与TGF-β1组相比Smad3与P300结合相对减少(0.62±0.10,1.46±0.12;P＜0.05),而PPARγ与P300结合相对增加(0.94±0.05,0.76±0.22;P＜0.05).结论 PPARγ配体能通过与Smad3竞争结合P300实现抑制TGF-β1诱导肺成纤维细胞分化,发挥抗纤维化效应。
过氧化物酶体增殖物激活受体γ在结缔组织病相关的肺间质病变中抗纤维化作用机制研究
【摘 要】
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目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在结缔组织病相关的间质性肺病(CTD-ILD)中的抗纤维化作用及机制.方法 免疫组织化学法检测PPARγ在37例CTD-ILD及20例对照组肺组织中表达.原代培养人肺成纤维细胞,无血清培养12h,加入转化生长因子(TGF)-β1(5 ng/ml)和(或)PPARγ的配体罗格列酮(0、1、5、10、20及40 μmol/L),继续培养,蛋白印迹法检
【机 构】
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510515广州,南方医科大学研究生学院,广东省人民医院风湿免疫科,广东省人民医院风湿免疫科,广东省人民医院医学研究中心,广东省人民医院风湿免疫科
【出 处】
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中华风湿病学杂志
【发表日期】
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2013年17期
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