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目的
探讨冻融的牛始基卵泡在体外三维培养的最适藻酸钠浓度。
方法玻璃化冷冻牛卵巢组织后复苏, 加入Liberase DH酶消化, 然后随机挑取始基卵泡, 将其分别培养在二维的培养系统中(对照组, A组)和浓度分别为0.5%(B组)、1%(C组)、2%(D组)的藻酸钠三维培养系统中培养8 d, 每隔1 d观察卵泡的生长情况, 测量卵泡直径以及雌二醇(E2)的分泌。
结果随着培养天数增加, 对照组中卵泡的完整性丧失, 卵母细胞和颗粒细胞分离, 而三维培养组中卵泡仍维持其完整性。体外培养8 d后, D组的卵泡平均直径为(57.7±8.5) μm, 大于B组和C组(P<0.05); 荧光染色后, D组的未受损卵泡率为68.4%, 较B组、C组高, 但仅B组、D组间有统计学差异(P<0.05); B组、C组、D组的E2水平均随培养时间的延长而分泌增加, 其中D组中的E2水平(98.5±7.8) pg/mL最高, 较B组、C组高, 但仅B组、D组间有统计学差异(P<0.05)。
结论藻酸钠三维培养系统较二维培养系统更适合始基卵泡的体外培养, 体积浓度为2%的藻酸钠凝胶较低浓度的藻酸钠凝胶更适合始基卵泡的生长发育。