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目的
克隆并表达中国莱姆病螺旋体(Borrelia afzelli)基因型代表菌株FP1的外膜蛋白C(OspC),并对其免疫保护性进行初步研究。
方法聚合酶链反应(PCR)扩增莱姆病螺旋体FP1的ospC基因,克隆至原核表达载体pET-30a上,构建pET-30a-OspC重组质粒,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达。表达产物用Ni-IDA树脂层析纯化,SDS-PAGE电泳、Western blot分析。将rOspC免疫新西兰白兔,间接免疫荧光方法(IFA)检测免疫前、后兔血清中特异性抗体IgG的滴度,进行体外中和试验,从而对OspC的免疫保护性有初步的了解。
结果重组质粒pET-30a-OspC构建成功并在宿主菌内高效表达;Western blot表明rOspC与莱姆病螺旋体FP1的多抗有明显的抗原抗体反应;rOspC免疫兔血清IgG效价显著升高(1∶3200或1∶6400);体外中和试验表明实验组的免疫兔血清均能中和106个/ml的莱姆病螺旋体。
结论莱姆病螺旋体的rOspC蛋白具有一定的免疫保护性,可作为研制莱姆病多价亚单位疫苗的一个成分。