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目的 One Heath视角下探讨昆明市接受过药学或药理学专业知识培训的医学及相关专业的高年级本科生抗生素多层次认知水平与使用行为.方法 2020年2月至2021年3月采用分层整群抽样法,线上调查昆明市2所高校医学、动物医学、药学及非医药学专业的1658名高年级本科生抗生素认知及使用行为,分析抗生素不同层次认知、使用行为的关系及其影响因素.结果 本科生抗生素基本知识、专业知识及超级细菌知识平均正确率范围分别为88.4％、88.7％、89.7％、81.1％;40.4％、38.3％、45.8％、36.4％;62.1％、63.2％、65.7％、55.0％.医学及药学学生的抗生素基本知识和专业知识水平高于非医药学学生;医学、药学学生的抗生素专业知识水平高于动物医学学生(P＜0.05).医学、药学学生的抗生素合理使用行为得分高于动物医学及非医药学学生(P＜0.05).Logistic回归分析结果显示抗生素基本知识得分高,抗生素使用行为趋于更合理;动物医学、非医药学学生的抗生素使用行为不合理的风险约是医学生的1.7倍.结论 已接受过药学或药理学专业课程教育的医药类高年级本科生的抗生素基本知识掌握尚好,但基于One Health角度的抗生素知识掌握不够全面;动物医学和非医药学学生对抗生素知识的掌握更次之;学生抗生素认知水平影响其抗生素的正确使用.