【摘 要】
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目的 获得人源中和性抗戊型肝炎病毒(HEV)单克隆基因工程抗体. 方法采用五轮筛选法(逐轮降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的4种含中和抗原表位的HEV 代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV 患者外周血源的噬菌体抗体库.获得有特异结合活性的噬菌体抗体,酶切鉴定抗体基因插入.切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因构建表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达抗HEV抗体Fab段,ELISA、Wester
【机 构】
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东南大学医学院遗传学研究中心,东南大学医学院遗传学研究中心,东南大学医学院遗传学研究中心,东南大学医学院遗传学研究中心,东南大学医学院微生物与免疫学教研室,东南大学医学院遗传学研究中心
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目的 获得人源中和性抗戊型肝炎病毒(HEV)单克隆基因工程抗体. 方法采用五轮筛选法(逐轮降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的4种含中和抗原表位的HEV 代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV 患者外周血源的噬菌体抗体库.获得有特异结合活性的噬菌体抗体,酶切鉴定抗体基因插入.切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因构建表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达抗HEV抗体Fab段,ELISA、Western blot检测抗体免疫学活性;测序分析抗体基因. 结果筛选出4株与含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体,可能为中和抗体.切去gⅢ基因,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中差异无显著性.可溶性抗体与含中和抗原表位的HEV ORF2重组混合抗原有特异结合活性,与BSA、HBsAg无交叉结合反应.Western blot显示在相对分子质量(Mr)略大于45×103处有一明显条带,与Mr 48×103的Fab大小一致.DNA测序分析表明,Fab段VH属于IgG VH3基因家族,VL属于Vκ1基因家族. 结论利用噬菌体抗体库技术成功获得抗HEV的人源单克隆抗体。
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