【摘 要】
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背景:帕金森病患者脑内黑质多巴胺能神经元变性导致芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic L-amino acid decarboxylase,AADC)活性水平的降低及波动是产生帕金森患者临床症状和在L-dop
【机 构】
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中山大学附属第二医院神经科,广东省,广州市,510120广州市脑科医院脑内科,广东省,广州市,510370;
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背景:帕金森病患者脑内黑质多巴胺能神经元变性导致芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic L-amino acid decarboxylase,AADC)活性水平的降低及波动是产生帕金森患者临床症状和在L-dopa替代治疗时“症状波动”等不良反应出现的重要原因之一.目的:探讨AADC基因脑内移植对帕金森病的治疗作用及其在左旋多巴治疗过程中的地位,并探讨阳离子脂质体介导的基因治疗方法的有效性.设计:2×2析因设计.地点和材料:中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心,材料主要包括人嗜铬细胞瘤组织,TRIzol,真核表达载体质粒pCDNA3,阳离子脂质体,6-OHDA,阿朴吗啡,AADC单克隆抗体,SD大鼠.干预:使用基因克隆、亚克隆技术构建pCDNA3-AADC真核表达载体;将帕金森病模型的SD大鼠随机分为实验组与对照组,分别以pCDNA3-AADC重组体和pCDNA3空载体进行阳离子脂质体包裹后,注射于帕金森病SD大鼠纹状体内,并在该基础上对两组大鼠分别采用一定浓度的L-dopa进行治疗.采用免疫组化方法确定AADC的表达.主要观察指标:①AADC基因脑内移植后两组大鼠的旋转行为.②采用一定浓度的L-dopa进行治疗对大鼠旋转行为的影响.结果:①阳离子脂质体包裹的pCDNA3-AADC重组体脑内注射后,在3,7,14,21,28 d时大鼠的旋转行为获得了一定的改善(P＜0.05),分别改善了56.0%,62.6%,49.4%,36.3%,27.4%,以1周时最为明显,在第5周时,其旋转行为则于移植前无明显差异(P＞0.05).②使用同等浓度的左旋多巴(L-dopa,10 mg/kg体质量·d)治疗后,在上述相同的时间点时,实验组较对照组明显改善模型大鼠的旋转行为(P＜0.05),以1周时最为明显,其旋转行为改善达93.4%,在第5周时,两组间差异无显著意义(P＞0.05).③免疫组化方法确定AADC在纹状体区的稳定表达.结论:增加脑内AADC基因表达可有效改善帕金森病大鼠的旋转行为,并可增加L-dopa治疗效果,有助在低剂量上长期维持L-dopa的疗效;阳离子脂质体介导的裸基因脑内移植技术为基因治疗帕金森病提供一种手段.
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