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摘 要：为评估烟台市白羽肉种鸡祖代场禽白血病净化效果，2020年11～12月，烟台市动物疫病预防与控制中心对7个祖代场、完成禽白血病净化的6个父母代场进行资料审查，并采集了1 350个种蛋、1 500份血清样品利用酶联免疫吸附方法进行检测。结果显示：祖代场、父母代场资料审查分值分别为92、89分，p27抗原个体阳性率均为0%。此次评估，为烟台地区白羽肉鸡种鸡场申报禽白血病的净化创建场奠定了基础。
关键词：烟台市;禽白血病;净化;效果评估
中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2021）8-0012-04
禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leucosis virus，ALV）引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，是二类动物疫病，分为A～K 11个亚群，其中J亚型发病率最高。目前该病尚未有效疫苗或药物防治，控制该病的主要方法是对鸡群持续进行ALV检测，淘汰带毒种鸡，以达到纯化鸡群的目的[1]。根据《动物疫病净化示范区评估标准（试行）（2019版）》中禽白血病净化示范区评估标准中的规定，种禽场评估方法为禽白血病病原学检测为阴性，样品类型为种蛋，检测方法为p27 抗原酶联免疫吸附试验[2]。
为了扎实推进烟台市白羽肉鸡主要疫病净化示范区建设项目，烟台市制定了2020年白羽肉鸡禽白血病净化示范区项目实施方案，要求2020完成年祖代種鸡场禽白血病净化评估工作。对此，本文按照《关于组织开展 2020年省级种畜禽场疫病净化场评估验收的通知》[3]对辖区内7个祖代鸡场、6个完成禽白血病净化的父母代场进行资料审查，抽检样品，开展禽白血病净化效果评估监测，同时为种鸡场申报禽白血病净化创建场奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 资料审查
按照山东省畜牧兽医局《关于组织开展 2020年省级种畜禽场疫病净化场评估验收的通知》对祖代场和完成净化的父母代场，进行资料审查。
1.2 实验室抽检
1.2.1 样品采集及处理 本研究抽取辖区内7个祖代场，6个父母代场作为审查对象。血清样品按照95%置信区间，预期合格率在90%，相对误差10%采集样品，每个场点采集150份血液，按照3000 r/min离心 5 min，上清液1.5 mL灭菌离心管中，冷冻保存。种蛋按照95%置信区间、2%感染率采集样品，每个场点采集种蛋150份，要求新鲜，取蛋清约1 mL，放于1.5 mL灭菌离心管中，冷冻保存备用。血清与种蛋样品应来自于同一栋舍。实验共采集血清样品1 500份、种蛋1 350个。
1.2.2 主要试剂和仪器 试剂分别为：禽白血病J亚群抗体ELISA试剂盒（批号：HR730，购自美国IDEXX公司）;禽白血病p27抗原ELISA试剂盒（批号：HR786，购自美国IDEXX公司）。严格按照试剂盒说明书进行检测，对疑似样品再进行双孔复检。
仪器主要有：96孔全自动洗板机（AquaMax2000型，美国MD公司）;全波长酶标仪（Spectra Max190型，美国MD公司）。
2 结果
2.1 资料审核
以《种鸡场主要疫病净化现场审查评分表》为参考，按照禽白血病净化效果评价指标（表1），对祖代场、父母代场禽白血病净化资料进行评分，详见表2。
2.2 实验室检测情况
检测血清样品1 500份，祖代5场、7场 ALV-J亚群阳性率分别为0.67%、5.3%，父母代8场 ALV-J亚群阳性率为0.67%、其他场区未检出 ALV-J亚群阳性;检测鸡蛋样品数1 350个，所有场区未检出ALV-p27抗原阳性，阳性率为0%，详见表3。
3 讨论
国外白羽育种公司相继在2004年前完成了禽白血病的净化，从烟台益生种畜禽有限公司对国外引种曾祖代、祖代鸡群监控检测数据来看，禽白血病处于净化状态。本文对辖区内祖代场、部分父母代场，按照《种鸡场主要疫病净化现场审查评分表》对禽白血病净化效果12个一级指标进行综合评分，祖代场、父母代场分值为92、89分，p27抗原阳性率均为0，据《动物疫病净化示范区评估标准（试行）（2019版）》中禽白血病净化示范区评估标准中的规定，种蛋p27抗原阳性率为0可判定为禽白血病阴性场，表明2个祖代场、6个父母代场已经完成禽白血病净化。
生物安全管理工作对于养殖场来说，是一种工作态度，此次资料审查按照《种鸡场主要疫病净化现场审查评分表》对禽白血病净化效果12个一级指标进行综合评分，祖代场、父母代场分值为92、89分，扣分点主要集中在缺少水质检测报告、消毒液配制和使用记录、消毒记录不完整等细节管理工作。与企业沟通，要求企业建立了完善的生物安全管理体系，按照“管住车、消好毒、用好料、看好门、净环境、关注邻、早诊断、盯住人”的二十四字方针，在工作中不断深化生物安全管理体系运行及监督。
祖代1场、2场、3场、5场鸡群尚未开产，每个场点各采集150份血清样品进行J亚群抗体检测，祖代5场J亚群抗体阳性率为0.67%，低于1%，可能是试剂盒检测过程中存在假阳性的原因。祖代4场、6场、7场同时采集血清和种蛋，检测J亚群抗体和p27抗原，4场、6场抗体和抗原阳性率均为0;7场J亚群阳性率为5.3%，p27抗原阳性率为0，鉴于祖代7场J亚群阳性率较高，建议对7场进行持续检测。父母代8场、10场、12场同时采集血清和种蛋，检测J亚群抗体和p27抗原，8场J亚群抗体阳性率为0.67%，低于1%，p27抗原阳性率为0;10场、12场抗体和抗原阳性率均为0。对于父母代9场、11场、13场因为种鸡周龄较大，只采集了种蛋，p27抗原阳性率均为0。以上数据表明烟台市辖区内2个祖代场、6个父母代场已经完成禽白血病净化，对于未开产的鸡群要求企业开展持续检测工作。 4 结论
本文对烟台辖区7个祖代场、完成禽白血病净化的6个父母代场进行资料审查，并采集了
1 350 个种蛋、1 500份血清样品利用酶联免疫吸附方法进行检测。结果发现祖代场、父母代场资料审查总分均不低于85分、p27抗原个体阳性率分别为0%。此次评估，为烟台地区白羽肉鸡种鸡场申报禽白血病的净化创建场奠定了基础。
参考文献：
[1] 俞燕，徐步，范建华，等.地方鸡种保种核心群禽白血病净化研究[J].中国家禽，2019，41（19）：16- 22.
[2] 中国动物疫病预防控制中心.关于印发《动物疫病净化示范区评估标准（试行）（2019版）》的通知：疫控（监）〔2019〕6号[A].北京：中国动物疫病预防控制中心，2019.
[3] 山东省畜牧兽医局.关于组织开展 2020 年省级种畜禽场疫病净化场评估验收的通知：鲁牧疫控发〔2020〕12 号[A].济南：山东省畜牧兽医局，2020.
Evaluation of the purification effect of avian leukemia in white feather broiler breeders in Yantai City in 2020
GAI Xiaojun1， WANG Xiaoling1， ZHAO Mengjiao1， LI Chunlei1， CHAI Shiqing1， CHEN Jing2*
（Yantai Animal Disease Prevention and Control Center， Yantai， 264003 China;
2. Shandong Animal Disease Prevention and Control Center， Jinan， 250000 China ）
Abstract： In order to evaluate the purification effect of avian leukemia in the ancestral farm of white feather broiler breeders in Yantai， from November to December 2020， Yantai Animal Disease Prevention and Control Center conducted data on 7 ancestral farms and 6 parent farms that completed the purification of avian leukemia Examined， and collected 1，350 breeding eggs， and 1，500 serum samples were tested by enzyme-linked immunosorbent method. The results showed that the data review scores of the ancestral field and the parental field were 92 and 89 points， respectively， and the positive rate of p27 antigen individuals was 0%. This assessment laid the foundation for the white feather broiler breeder farms in Yantai area to declare the purification and establishment of avian leukemia farms.
Keywords： Yantai City; Avian Leukemia; Purification; Effect Evaluation
收稿日期：2021-07-25
*基金項目：国家重点研发计划项目-肉鸡养殖废弃物资源化利用技术集成与示范，项目编号：2018YFD0501405;山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队建设项目，种畜禽场疫病净化项目（SDAIT-11-13），山东省烟台市白羽肉鸡主要疫病区域净化示范区建设项目。
作者简介：盖小君（1973.09-），男，硕士，山东莱阳人，兽医师，主要从事动物疫病防控工作，E-mail：249386729@qqcom。
**通讯作者：陈静，女，博士，研究员，主要从事动物疫病检测及防控工作，E-mail：1752058646@qq.com。
关键词：烟台市;禽白血病;净化;效果评估
中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2021）8-0012-04
禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leucosis virus，ALV）引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，是二类动物疫病，分为A～K 11个亚群，其中J亚型发病率最高。目前该病尚未有效疫苗或药物防治，控制该病的主要方法是对鸡群持续进行ALV检测，淘汰带毒种鸡，以达到纯化鸡群的目的[1]。根据《动物疫病净化示范区评估标准（试行）（2019版）》中禽白血病净化示范区评估标准中的规定，种禽场评估方法为禽白血病病原学检测为阴性，样品类型为种蛋，检测方法为p27 抗原酶联免疫吸附试验[2]。
为了扎实推进烟台市白羽肉鸡主要疫病净化示范区建设项目，烟台市制定了2020年白羽肉鸡禽白血病净化示范区项目实施方案，要求2020完成年祖代種鸡场禽白血病净化评估工作。对此，本文按照《关于组织开展 2020年省级种畜禽场疫病净化场评估验收的通知》[3]对辖区内7个祖代鸡场、6个完成禽白血病净化的父母代场进行资料审查，抽检样品，开展禽白血病净化效果评估监测，同时为种鸡场申报禽白血病净化创建场奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 资料审查
按照山东省畜牧兽医局《关于组织开展 2020年省级种畜禽场疫病净化场评估验收的通知》对祖代场和完成净化的父母代场，进行资料审查。
1.2 实验室抽检
1.2.1 样品采集及处理 本研究抽取辖区内7个祖代场，6个父母代场作为审查对象。血清样品按照95%置信区间，预期合格率在90%，相对误差10%采集样品，每个场点采集150份血液，按照3000 r/min离心 5 min，上清液1.5 mL灭菌离心管中，冷冻保存。种蛋按照95%置信区间、2%感染率采集样品，每个场点采集种蛋150份，要求新鲜，取蛋清约1 mL，放于1.5 mL灭菌离心管中，冷冻保存备用。血清与种蛋样品应来自于同一栋舍。实验共采集血清样品1 500份、种蛋1 350个。
1.2.2 主要试剂和仪器 试剂分别为：禽白血病J亚群抗体ELISA试剂盒（批号：HR730，购自美国IDEXX公司）;禽白血病p27抗原ELISA试剂盒（批号：HR786，购自美国IDEXX公司）。严格按照试剂盒说明书进行检测，对疑似样品再进行双孔复检。
仪器主要有：96孔全自动洗板机（AquaMax2000型，美国MD公司）;全波长酶标仪（Spectra Max190型，美国MD公司）。
2 结果
2.1 资料审核
以《种鸡场主要疫病净化现场审查评分表》为参考，按照禽白血病净化效果评价指标（表1），对祖代场、父母代场禽白血病净化资料进行评分，详见表2。
2.2 实验室检测情况
检测血清样品1 500份，祖代5场、7场 ALV-J亚群阳性率分别为0.67%、5.3%，父母代8场 ALV-J亚群阳性率为0.67%、其他场区未检出 ALV-J亚群阳性;检测鸡蛋样品数1 350个，所有场区未检出ALV-p27抗原阳性，阳性率为0%，详见表3。
3 讨论
国外白羽育种公司相继在2004年前完成了禽白血病的净化，从烟台益生种畜禽有限公司对国外引种曾祖代、祖代鸡群监控检测数据来看，禽白血病处于净化状态。本文对辖区内祖代场、部分父母代场，按照《种鸡场主要疫病净化现场审查评分表》对禽白血病净化效果12个一级指标进行综合评分，祖代场、父母代场分值为92、89分，p27抗原阳性率均为0，据《动物疫病净化示范区评估标准（试行）（2019版）》中禽白血病净化示范区评估标准中的规定，种蛋p27抗原阳性率为0可判定为禽白血病阴性场，表明2个祖代场、6个父母代场已经完成禽白血病净化。
生物安全管理工作对于养殖场来说，是一种工作态度，此次资料审查按照《种鸡场主要疫病净化现场审查评分表》对禽白血病净化效果12个一级指标进行综合评分，祖代场、父母代场分值为92、89分，扣分点主要集中在缺少水质检测报告、消毒液配制和使用记录、消毒记录不完整等细节管理工作。与企业沟通，要求企业建立了完善的生物安全管理体系，按照“管住车、消好毒、用好料、看好门、净环境、关注邻、早诊断、盯住人”的二十四字方针，在工作中不断深化生物安全管理体系运行及监督。
祖代1场、2场、3场、5场鸡群尚未开产，每个场点各采集150份血清样品进行J亚群抗体检测，祖代5场J亚群抗体阳性率为0.67%，低于1%，可能是试剂盒检测过程中存在假阳性的原因。祖代4场、6场、7场同时采集血清和种蛋，检测J亚群抗体和p27抗原，4场、6场抗体和抗原阳性率均为0;7场J亚群阳性率为5.3%，p27抗原阳性率为0，鉴于祖代7场J亚群阳性率较高，建议对7场进行持续检测。父母代8场、10场、12场同时采集血清和种蛋，检测J亚群抗体和p27抗原，8场J亚群抗体阳性率为0.67%，低于1%，p27抗原阳性率为0;10场、12场抗体和抗原阳性率均为0。对于父母代9场、11场、13场因为种鸡周龄较大，只采集了种蛋，p27抗原阳性率均为0。以上数据表明烟台市辖区内2个祖代场、6个父母代场已经完成禽白血病净化，对于未开产的鸡群要求企业开展持续检测工作。 4 结论
本文对烟台辖区7个祖代场、完成禽白血病净化的6个父母代场进行资料审查，并采集了
1 350 个种蛋、1 500份血清样品利用酶联免疫吸附方法进行检测。结果发现祖代场、父母代场资料审查总分均不低于85分、p27抗原个体阳性率分别为0%。此次评估，为烟台地区白羽肉鸡种鸡场申报禽白血病的净化创建场奠定了基础。
参考文献：
[1] 俞燕，徐步，范建华，等.地方鸡种保种核心群禽白血病净化研究[J].中国家禽，2019，41（19）：16- 22.
[2] 中国动物疫病预防控制中心.关于印发《动物疫病净化示范区评估标准（试行）（2019版）》的通知：疫控（监）〔2019〕6号[A].北京：中国动物疫病预防控制中心，2019.
[3] 山东省畜牧兽医局.关于组织开展 2020 年省级种畜禽场疫病净化场评估验收的通知：鲁牧疫控发〔2020〕12 号[A].济南：山东省畜牧兽医局，2020.
Evaluation of the purification effect of avian leukemia in white feather broiler breeders in Yantai City in 2020
GAI Xiaojun1， WANG Xiaoling1， ZHAO Mengjiao1， LI Chunlei1， CHAI Shiqing1， CHEN Jing2*
（Yantai Animal Disease Prevention and Control Center， Yantai， 264003 China;
2. Shandong Animal Disease Prevention and Control Center， Jinan， 250000 China ）
Abstract： In order to evaluate the purification effect of avian leukemia in the ancestral farm of white feather broiler breeders in Yantai， from November to December 2020， Yantai Animal Disease Prevention and Control Center conducted data on 7 ancestral farms and 6 parent farms that completed the purification of avian leukemia Examined， and collected 1，350 breeding eggs， and 1，500 serum samples were tested by enzyme-linked immunosorbent method. The results showed that the data review scores of the ancestral field and the parental field were 92 and 89 points， respectively， and the positive rate of p27 antigen individuals was 0%. This assessment laid the foundation for the white feather broiler breeder farms in Yantai area to declare the purification and establishment of avian leukemia farms.
Keywords： Yantai City; Avian Leukemia; Purification; Effect Evaluation
收稿日期：2021-07-25
*基金項目：国家重点研发计划项目-肉鸡养殖废弃物资源化利用技术集成与示范，项目编号：2018YFD0501405;山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队建设项目，种畜禽场疫病净化项目（SDAIT-11-13），山东省烟台市白羽肉鸡主要疫病区域净化示范区建设项目。
作者简介：盖小君（1973.09-），男，硕士，山东莱阳人，兽医师，主要从事动物疫病防控工作，E-mail：249386729@qqcom。
**通讯作者：陈静，女，博士，研究员，主要从事动物疫病检测及防控工作，E-mail：1752058646@qq.com。