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中图分类号：S831.2 文献标识码：C 文章编号：1673-1085（2021）8-0016-03
对于种鸡生产场来说，种公鸡的饲养管理至关重要。对于笼养授精饲养模式来说，种公鸡的精液是最关键的因素，种公鸡的精液质量直接影响着种蛋的受精率、孵化性能、雏鸡数量与质量，进而与种鸡场的经济效益挂钩。但是种公鸡的精液质量在个体之间存在很大差异，影响公鸡精液质量的因素有很多，比如：公鸡体重、体况、周龄、营养水平、饲料配方、管理水平、采集手法以及遗传基因等方面。据统计只有 1/3～1/2 （部分品种可达到2/3）的公鸡精液质量是良好的，所以对精液质量进行检测，是保障较高种蛋受精率、高水平雏鸡质量的重要措施，是筛选优秀种公鸡、淘汰精液质量不合格的鸡只的有效措施，是降低公母比例、降低饲养成本、提高种鸡场经济效益的必要措施。
目前，精液质量检测与选育工作在实际生产中并未广泛推广使用，主要原因在于：精液质量实验室检测程序复杂，检测设备专业化要求高，检测速度慢，难以进行大规模的推广;生产单位对精液质量检测和选育的意义认识不到位，忽略精液质量检测和选育工作。
本文主要对公鸡精液质量检测方法在种鸡场中的可操作性进行探讨。通过对人工授精的公鸡精液量进行检测，进而量化授精精子数，选留优秀公鸡，降低公母比例，降低饲养成本。
1 公鸡精液质量的检测方法与内容
考虑到种鸡场条件、设备有限，公鸡精液质量检测内容主要为单次排精量、精液外观、精子活性与精子密度，其中精子活性与精子密度主要使用显微镜进行计数检测。
1.1 检测材料
恒温显微镜（山东牛尔电子科技有限公司），0.0025 mm2精子计数板（上海富雪生物科技有限公司），集精杯，1 mL离心管，6 mL玻璃管，50 uL移液器，1 mL移液器，相应规格移液器滴头，保温桶，计数器，PBS缓冲液，纱布，托盘。
1.2 采精器具的准备
将集精杯、玻璃管、移液器滴头、胶头滴管用清水刷洗干净，如有清洗不净的污垢，可使用酸和碱浸泡清除。
将滴管装入盛有10%火碱（碱性清洁剂）溶液的塑料桶1中（溶液必须没过滴管）浸泡24 h，清水冲洗干净;然后将清洗后的滴管放入盛有 10%过氧乙酸溶液（酸性清洁剂）的塑料桶2中（溶液必须没过滴管）浸泡 24 h，清水反复冲洗干净，清洗完成后避免酸碱残留可以用 pH 试纸测量一下，保证无误。将水滴甩干，玻璃器具在烤箱中用140 ℃的温度烘烤 4 h（集精杯内壁不出现水气为止），塑料器具使用110 ℃烘烤30 min，待烤箱和玻璃管、离心管等冷却后，将采集器具放在托盘中覆盖清洁纱布待用。
1.3 保温桶准备
将保温桶中加入温水，调整水温至37 ℃，放入插有1 mL或6 mL玻璃管（编号）的泡沫板，备用。
1.4 制备PBS缓冲液
称取KCl 0.2g、NaCl 8g、Na2HPO4 1.44g、KH2PO4 0.24g溶解于800 mL蒸馏水中，用HCl调节溶液pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L即可。
1.5 采精
采精一般采用背腹式按摩采精法，一般两人操作，一人采精，一人收集精液。采精员将公鸡双腿固定于两腿间，头朝左后方，尾部朝前，采精员左手拇指与其他四指自然分开，以掌面贴在公鸡背面翅内侧向尾部区域轻快按摩，待公鸡出现性发射（尾羽上翘，泄殖腔外翻），立即用左手掌将尾羽向背部拨，使其上翻，拇指和食指放在勃起的交配沟两侧，向交配器挤压，右手握集精杯贴近交配器承接流出的精液即可。另一人将集精杯内的公鸡精液用移液器转至1 mL离心管，封闭离心管，读取精液量刻度并记录在相应表格中。每只公鸡一个离心管，并按照鸡只编号进行编号，将离心管放到保温桶中的泡沫板上，由专人送到检测室，检测室尽量选择生产区域的房间，减少外界干扰。
1.6 稀释液预温
将PBS缓冲液放在水温为37 ℃的水浴锅中进行预温，使用PBS缓冲液稀释，可保证精子正常渗透压，保证精子活力。
1.7 稀释精液
用50 μL的移液器吸取20 μL的精液加至加有5 mL PBS缓冲液的6 mL玻璃管中，移液器滴头深入稀释液中，缓慢注入，然后用1 mL移液器轻轻吹打溶液混匀溶液即可，稀释倍数为1︰400。
1.8 精液镜下检测
将恒温显微镜载物台温度调整至37 ℃，将精子计数板放于载物台上进行预温。调整螺旋使视野中至计数板大方格清晰，使用100×即可。用50 μL的移液器吸取适量稀释后的精液滴入精子计数板中，滴入过程缓慢，保证精子充满整个计数池。
1.8.1 精子数量计数方法 1 mL原精液精子数量N=n×50×1000×m，m为稀释倍数，n为读取视野中5个正方格的精子总数。
1.8.2 精子活力评定方法 ①活力好，精子在镜下呈现开水煮沸状，云雾状;②活力一般，精子在镜下呈现直线前进运动;③活力差，精子在鏡下游动缓慢。
1.8.3 记录 将每只公鸡的精液进行镜检，记录其精子数量以及活力。
1.8.4 检测举例 检测某种鸡场的公鸡，周龄60～61周，每只采精量为0.4 mL，在100×镜下见图1所示。
那么1 mL原精液的精子数量为N=216×50×1000×400=4320000000，即1 mL原精液精子数约为43.2亿;同时该份精液精子在镜下部分呈现快速直线运动，部分呈现沸腾状，说明该份精液活性较好。
2 讨论
2.1 精液量的测定 测定结果受多因素影响，比如：品种差异、个体差异、采精人员的熟练度、采精手法等。一般公鸡的射精量在0.4 mL以上，实际生产中精液量低于 0.4 mL的公雞建议调出供精序列，单独饲养管理，而在选育公鸡的过程中则建议对低于0.4 mL的公鸡进行淘汰。
2.2 精液外观检查
精液采集完成后，需要对精液的外观进行检查，并记录在相应的表格中。正常的精液应该是乳白色、不透明的乳状液体（精液里若存在白色絮状物，为尿酸盐沉积）。精液采集过程中容易受到粪便污染，需要注意采精手法与力度。对精液稀薄、发黄、带血的鸡只，应停止采精，让其休息2轮后，根据采集精液情况判断，如果依旧存在以上问题，建议淘汰该公鸡。
2.3 精子活力
精子活力是指在37 ℃环境下，前进运动精子数占总精子数的百分比。鸡精子和卵子的受精部位在输卵管壶腹部，即精子进入生殖道后仍需向受精部位运行，其运行能量来源于生殖道的收缩辅助与精子自身的活动力，在此过程中精子完成获能同。因此要完成上述全部过程，对输入母鸡生殖道内的精液有一定的要求，精液中必须有一定比例活力强的精子，活力好的精子在显微镜下的表现是呈直线运动，故精子活力是鉴定精液质量最主要的指标之一。通过检测公鸡的精子活力获知该鸡的饲养水平与遗传性能，在实际生产与育种过程中对公鸡进行有效的控制。
2.4 精子数检测
精子数检测指检测每毫升精液中精子的数量。通过显微镜检测方法确定每毫升精液的精子数，从而确定每只母鸡的输精量。可以根据受精率的需要，调整输精量，对输精量进行具体化，在满足最佳受精率的前提下，降低输精量，而不是全群统一的20～30 μL原精液，从而实现公母比例的合理化，降低饲养公鸡数量。
3 小结
受精率是种鸡场关键生产指标之一，直接影响着出雏鸡数量，进而影响经济效益，而种公鸡的精液质量直接影响着种蛋的受精率，因此控制好种公鸡的精液质量是任何一个种鸡场都必须重视的工作。在人工授精技术中，不仅要考虑精液的遗传品质，同时也要考虑到精液的繁殖性状（包括精液量、精子密度、精子活力、输入母鸡体内的有效精子数），故对精液质量进行准确与可靠的检测，需要规范的检测技术，同时加大对精液质量检测和选育过程的监控力度，保证精液质量检测和选育过程的有效进行。种公鸡精液质量检测是一项操作简单、用工量少的常规技术，目前已在育种单位得到了推广和应用，也应该应用于种鸡场的常规生产中。
通过检测公鸡精液质量，不但可以随时掌控公鸡发育与繁殖性状，调控供精公鸡序列，还能确定母鸡优秀受精率所需要的最低精子数量，降低精液总需求量，从而合理降低公母比例，减少公鸡饲喂量，降低成本，增加种鸡场经济效益。
收稿日期：2021-07-15
作者简介：来庆梅（1986- ），女，兽医本科，主要从事规模化养殖场养殖技术与实验室血清学诊断。E-maiL：lqm07517@163.com;共同第一作者：王世涛（1987- ）男，兽医硕士，主要从事规模化养殖场新品种研发、管理与禽病临床诊治。E-maiL：wstysgf@163.com。
**通讯作者：郭龙宗（1981- ），男，兽医硕士，主要从事规模化养殖场禽病临床诊治和实验室管理。E-maiL：guoLongzong1981@163.com。
对于种鸡生产场来说，种公鸡的饲养管理至关重要。对于笼养授精饲养模式来说，种公鸡的精液是最关键的因素，种公鸡的精液质量直接影响着种蛋的受精率、孵化性能、雏鸡数量与质量，进而与种鸡场的经济效益挂钩。但是种公鸡的精液质量在个体之间存在很大差异，影响公鸡精液质量的因素有很多，比如：公鸡体重、体况、周龄、营养水平、饲料配方、管理水平、采集手法以及遗传基因等方面。据统计只有 1/3～1/2 （部分品种可达到2/3）的公鸡精液质量是良好的，所以对精液质量进行检测，是保障较高种蛋受精率、高水平雏鸡质量的重要措施，是筛选优秀种公鸡、淘汰精液质量不合格的鸡只的有效措施，是降低公母比例、降低饲养成本、提高种鸡场经济效益的必要措施。
目前，精液质量检测与选育工作在实际生产中并未广泛推广使用，主要原因在于：精液质量实验室检测程序复杂，检测设备专业化要求高，检测速度慢，难以进行大规模的推广;生产单位对精液质量检测和选育的意义认识不到位，忽略精液质量检测和选育工作。
本文主要对公鸡精液质量检测方法在种鸡场中的可操作性进行探讨。通过对人工授精的公鸡精液量进行检测，进而量化授精精子数，选留优秀公鸡，降低公母比例，降低饲养成本。
1 公鸡精液质量的检测方法与内容
考虑到种鸡场条件、设备有限，公鸡精液质量检测内容主要为单次排精量、精液外观、精子活性与精子密度，其中精子活性与精子密度主要使用显微镜进行计数检测。
1.1 检测材料
恒温显微镜（山东牛尔电子科技有限公司），0.0025 mm2精子计数板（上海富雪生物科技有限公司），集精杯，1 mL离心管，6 mL玻璃管，50 uL移液器，1 mL移液器，相应规格移液器滴头，保温桶，计数器，PBS缓冲液，纱布，托盘。
1.2 采精器具的准备
将集精杯、玻璃管、移液器滴头、胶头滴管用清水刷洗干净，如有清洗不净的污垢，可使用酸和碱浸泡清除。
将滴管装入盛有10%火碱（碱性清洁剂）溶液的塑料桶1中（溶液必须没过滴管）浸泡24 h，清水冲洗干净;然后将清洗后的滴管放入盛有 10%过氧乙酸溶液（酸性清洁剂）的塑料桶2中（溶液必须没过滴管）浸泡 24 h，清水反复冲洗干净，清洗完成后避免酸碱残留可以用 pH 试纸测量一下，保证无误。将水滴甩干，玻璃器具在烤箱中用140 ℃的温度烘烤 4 h（集精杯内壁不出现水气为止），塑料器具使用110 ℃烘烤30 min，待烤箱和玻璃管、离心管等冷却后，将采集器具放在托盘中覆盖清洁纱布待用。
1.3 保温桶准备
将保温桶中加入温水，调整水温至37 ℃，放入插有1 mL或6 mL玻璃管（编号）的泡沫板，备用。
1.4 制备PBS缓冲液
称取KCl 0.2g、NaCl 8g、Na2HPO4 1.44g、KH2PO4 0.24g溶解于800 mL蒸馏水中，用HCl调节溶液pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L即可。
1.5 采精
采精一般采用背腹式按摩采精法，一般两人操作，一人采精，一人收集精液。采精员将公鸡双腿固定于两腿间，头朝左后方，尾部朝前，采精员左手拇指与其他四指自然分开，以掌面贴在公鸡背面翅内侧向尾部区域轻快按摩，待公鸡出现性发射（尾羽上翘，泄殖腔外翻），立即用左手掌将尾羽向背部拨，使其上翻，拇指和食指放在勃起的交配沟两侧，向交配器挤压，右手握集精杯贴近交配器承接流出的精液即可。另一人将集精杯内的公鸡精液用移液器转至1 mL离心管，封闭离心管，读取精液量刻度并记录在相应表格中。每只公鸡一个离心管，并按照鸡只编号进行编号，将离心管放到保温桶中的泡沫板上，由专人送到检测室，检测室尽量选择生产区域的房间，减少外界干扰。
1.6 稀释液预温
将PBS缓冲液放在水温为37 ℃的水浴锅中进行预温，使用PBS缓冲液稀释，可保证精子正常渗透压，保证精子活力。
1.7 稀释精液
用50 μL的移液器吸取20 μL的精液加至加有5 mL PBS缓冲液的6 mL玻璃管中，移液器滴头深入稀释液中，缓慢注入，然后用1 mL移液器轻轻吹打溶液混匀溶液即可，稀释倍数为1︰400。
1.8 精液镜下检测
将恒温显微镜载物台温度调整至37 ℃，将精子计数板放于载物台上进行预温。调整螺旋使视野中至计数板大方格清晰，使用100×即可。用50 μL的移液器吸取适量稀释后的精液滴入精子计数板中，滴入过程缓慢，保证精子充满整个计数池。
1.8.1 精子数量计数方法 1 mL原精液精子数量N=n×50×1000×m，m为稀释倍数，n为读取视野中5个正方格的精子总数。
1.8.2 精子活力评定方法 ①活力好，精子在镜下呈现开水煮沸状，云雾状;②活力一般，精子在镜下呈现直线前进运动;③活力差，精子在鏡下游动缓慢。
1.8.3 记录 将每只公鸡的精液进行镜检，记录其精子数量以及活力。
1.8.4 检测举例 检测某种鸡场的公鸡，周龄60～61周，每只采精量为0.4 mL，在100×镜下见图1所示。
那么1 mL原精液的精子数量为N=216×50×1000×400=4320000000，即1 mL原精液精子数约为43.2亿;同时该份精液精子在镜下部分呈现快速直线运动，部分呈现沸腾状，说明该份精液活性较好。
2 讨论
2.1 精液量的测定 测定结果受多因素影响，比如：品种差异、个体差异、采精人员的熟练度、采精手法等。一般公鸡的射精量在0.4 mL以上，实际生产中精液量低于 0.4 mL的公雞建议调出供精序列，单独饲养管理，而在选育公鸡的过程中则建议对低于0.4 mL的公鸡进行淘汰。
2.2 精液外观检查
精液采集完成后，需要对精液的外观进行检查，并记录在相应的表格中。正常的精液应该是乳白色、不透明的乳状液体（精液里若存在白色絮状物，为尿酸盐沉积）。精液采集过程中容易受到粪便污染，需要注意采精手法与力度。对精液稀薄、发黄、带血的鸡只，应停止采精，让其休息2轮后，根据采集精液情况判断，如果依旧存在以上问题，建议淘汰该公鸡。
2.3 精子活力
精子活力是指在37 ℃环境下，前进运动精子数占总精子数的百分比。鸡精子和卵子的受精部位在输卵管壶腹部，即精子进入生殖道后仍需向受精部位运行，其运行能量来源于生殖道的收缩辅助与精子自身的活动力，在此过程中精子完成获能同。因此要完成上述全部过程，对输入母鸡生殖道内的精液有一定的要求，精液中必须有一定比例活力强的精子，活力好的精子在显微镜下的表现是呈直线运动，故精子活力是鉴定精液质量最主要的指标之一。通过检测公鸡的精子活力获知该鸡的饲养水平与遗传性能，在实际生产与育种过程中对公鸡进行有效的控制。
2.4 精子数检测
精子数检测指检测每毫升精液中精子的数量。通过显微镜检测方法确定每毫升精液的精子数，从而确定每只母鸡的输精量。可以根据受精率的需要，调整输精量，对输精量进行具体化，在满足最佳受精率的前提下，降低输精量，而不是全群统一的20～30 μL原精液，从而实现公母比例的合理化，降低饲养公鸡数量。
3 小结
受精率是种鸡场关键生产指标之一，直接影响着出雏鸡数量，进而影响经济效益，而种公鸡的精液质量直接影响着种蛋的受精率，因此控制好种公鸡的精液质量是任何一个种鸡场都必须重视的工作。在人工授精技术中，不仅要考虑精液的遗传品质，同时也要考虑到精液的繁殖性状（包括精液量、精子密度、精子活力、输入母鸡体内的有效精子数），故对精液质量进行准确与可靠的检测，需要规范的检测技术，同时加大对精液质量检测和选育过程的监控力度，保证精液质量检测和选育过程的有效进行。种公鸡精液质量检测是一项操作简单、用工量少的常规技术，目前已在育种单位得到了推广和应用，也应该应用于种鸡场的常规生产中。
通过检测公鸡精液质量，不但可以随时掌控公鸡发育与繁殖性状，调控供精公鸡序列，还能确定母鸡优秀受精率所需要的最低精子数量，降低精液总需求量，从而合理降低公母比例，减少公鸡饲喂量，降低成本，增加种鸡场经济效益。
收稿日期：2021-07-15
作者简介：来庆梅（1986- ），女，兽医本科，主要从事规模化养殖场养殖技术与实验室血清学诊断。E-maiL：lqm07517@163.com;共同第一作者：王世涛（1987- ）男，兽医硕士，主要从事规模化养殖场新品种研发、管理与禽病临床诊治。E-maiL：wstysgf@163.com。
**通讯作者：郭龙宗（1981- ），男，兽医硕士，主要从事规模化养殖场禽病临床诊治和实验室管理。E-maiL：guoLongzong1981@163.com。