杜氏盐藻基因DsSP的克隆、分析和原核表达

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[目的]克隆盐藻淀粉磷酸化酶基因,并初步分析其基本性质和表达蛋白.[方法]采用RT-PCR和RACE的方法克隆基因;生物信息学系统分析其性质;构建原核表达载PGS21a-DsSP转化于E.coli BL21表达蛋白,采用GST-SefinoseTMKit和Western Blot分别纯化、检测该融合蛋白.[结果]成功克隆出1种淀粉磷酸化酶(GenBank accession No.KF061044)命名为DsSP;分析得到了其基本性质并预测了该蛋白的亚细胞定位、二级结构和三级结构;该融合蛋白在上清和包涵体中均存在,且对上清蛋白成功纯化;Western Blot检测表明其在E.coli.BL21中成功表达.[结论]为进一步阐明DsSP的功能及作用机制奠定了理论基础.
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