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目的 在大肠杆菌中表达并纯化DC-SIGN融合蛋白并对该融合蛋白的抗原特异性和生物学活性进行分析. 方法以重组质粒pcDNA3.1-DC-SIGN为模板,进行PCR扩增出带KpnⅠ和SacⅠ酶切位点的人DC-SIGN凝集素cDNA,经相应酶切后插入原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌AD494(DE3),经IPTG诱导表达DC-SIGN 融合蛋白,用Ni2+-NTA树脂对融合蛋白进行纯化,以Western blot试验进行鉴定,通过HIV与DC-SIGN的亲和实验研究融合蛋白的生物学活性. 结果酶切鉴定证实DC-SIGN凝集素基因已插入原核表达载体pET-32a(+).重组表达质粒pET-32a(+)-DL在大肠杆菌AD494(DE3)中成功表达了DC-SIGN 融合蛋白,其相对分子质量(Mr)约为35×103.Ni2+-NTA树脂纯化后,融合蛋白的纯度可达90%以上.Western blot试验显示DC-SIGN融合蛋白与鼠抗人DC-SIGN抗体有特异性免疫反应. 结论在大肠杆菌中表达DC-SIGN融合蛋白,用亲和层析的方法对其进行初步纯化;HIV与DC-SIGN的亲和实验表明,可溶性DC-SIGN融合蛋白能抑制R5和X4 HIV与DC-SIGN受体结合。