论文部分内容阅读
目的
探讨低氧条件对人角膜上皮天然免疫的影响机制，以揭示低氧导致角膜感染发生率和严重程度增加的作用机制。
方法永生化人角膜上皮细胞(THCEs)分别置于常氧(21% O2)和低氧(1% O2)条件下37 ℃培养，并于不同时间点(0、6、12、24、48 h)收集细胞，分别采用实时PCR和Western印迹检测Toll样受体(TLR)4 mRNA和蛋白的表达水平。应用TLR4的公认配体脂多糖(LPS)(1 μg/ml)分别刺激常氧组和低氧组THCEs 6 h，收取细胞采用实时PCR检测TLR通路分子髓样分化因子88(MyD88)、白细胞介素(IL)6、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-6、IL-8及TNF-α蛋白表达水平，并利用Western印迹检测核因子-κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)和磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)的表达水平。
结果低氧孵育THCEs 48 h后，TLR4的mRNA和蛋白水平均明显减低，分别下调90%和55%。LPS刺激试验结果显示，与常氧组比较，低氧下调63%的MyD88 mRNA表达量，抑制IκBα的磷酸化(下调59%)，下调炎性细胞因子IL-6、IL-8和TNF-α的分泌(mRNA表达分别下调84%、88%及91%，蛋白表达分别下调31%、55%及50%)。
结论低氧可能通过抑制TLR4的表达及其信号通路的活化，降低人角膜上皮的天然免疫反应，增加角膜感染率。