【摘 要】
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目的 分离并鉴定2010年云南省昆明市甲型肝炎患儿粪便标本中混存的ECHO20 (Echovirus 20,ECHO20)KM/EV20/2010病毒株,分析其VP1基因遗传特征. 方法 采用KMB17细胞对大便标本
【机 构】
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中国医学科学院,北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,云南昆明650118
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目的 分离并鉴定2010年云南省昆明市甲型肝炎患儿粪便标本中混存的ECHO20 (Echovirus 20,ECHO20)KM/EV20/2010病毒株,分析其VP1基因遗传特征. 方法 采用KMB17细胞对大便标本进行病毒分离;采用微量细胞病变法,经WHO肠道病毒组合血清及单价血清对该分离株进行鉴定;采用RT-PCR法扩增病毒VP1基因并进行序列测定,并运用Mega 4.0等软件进行分析处理. 结果 分离毒株经微量中和试验鉴定为ECHO20血清型,编号为KM/EV20/2010;经RT-PCR法扩增获得为867 bp的VP1基因,与国内分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为79.5％～91.7％和98.9％～99.6％,与国外分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.2％～83.2％和96.4％～99.6％;在进化树上云南分离株与GenBank中登录的中国国内2001年山东分离株01352和1998年法国分离株94CF1666形成一个进化分支. 结论 KM/EV20/2010分离株为肠道病毒ECHO20型病毒,可用KMB17人二倍体胚肺成纤维细胞分离增殖.
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