【摘 要】
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目的 建立一种快速、敏感、特异的Real-time PCR(实时荧光定量PCR)方法,用于裂谷热病毒(RVFV)的检测.方法 根据裂谷热病毒N蛋白基因的保守序列设计并合成一对引物及特异性Taq
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122;吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,吉林长春130122;吉林农业大学动物科技学院,吉林长春130118;中国农业科学院生物技术研究所,北京100
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目的 建立一种快速、敏感、特异的Real-time PCR(实时荧光定量PCR)方法,用于裂谷热病毒(RVFV)的检测.方法 根据裂谷热病毒N蛋白基因的保守序列设计并合成一对引物及特异性TaqMan探针.通过条件优化,以10倍系列稀释重组质粒为标准品,进行Real-time PCR扩增,绘制标准曲线,并进行重复性、准确性、特异性及敏感性检测.结果 建立的Real-time PCR方法检测裂谷热病毒所绘制标准曲线的相关系数大于0.99,灵敏度为1.0×101拷贝,高于常规PCR方法(1.0×103拷贝);除裂谷热病毒外的其他7种对照烈性病病原体基因检测均呈阴性;批内重复和批间重复的变异系数均小于1％.结论 建立的裂谷热病毒Real-time PCR检测方法敏感性和特异性较高,可用于裂谷热病毒感染快速诊断及流行病学调查.
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