【摘 要】
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目的探讨凋亡及其相关基因在自身免疫性内耳病形成和发展中的作用.方法选用近交系C57BL/6小鼠随机数字表法分为正常对照组和免疫7、14、21、28 d组,每组16只.提取豚鼠内耳膜迷路组织为抗原,与等量完全弗氏佐剂,百日咳杆菌一次免疫实验组动物,制备自身免疫性内耳病动物模型,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(terminal deoxynucleotidyl transfer
【机 构】
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浙江大学医学院附属第一医院耳鼻咽喉科,310003(原中国医学科学院中闰协和医科大学北京协和医院耳鼻咽喉科,100730),中国医学科学院基础医学研究所神经免疫教研室,中华医学会,中国医学科学院中闰协
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目的探讨凋亡及其相关基因在自身免疫性内耳病形成和发展中的作用.
方法选用近交系C57BL/6小鼠随机数字表法分为正常对照组和免疫7、14、21、28 d组,每组16只.提取豚鼠内耳膜迷路组织为抗原,与等量完全弗氏佐剂,百日咳杆菌一次免疫实验组动物,制备自身免疫性内耳病动物模型,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d-UTP nick end-labing,TUNEL)检测内耳中的细胞凋亡,应用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Fas、FasL及bcl-2在内耳的表达.
结果正常小鼠内耳组织中,TUNEL染色阳性细胞极为少见,偶尔在Corti器或球囊斑的支持细胞发现.免疫7 d后,内毛细胞和少量的血管纹边缘细胞TUNEL染色阳性,14 d后TUNEL 染色阳性的细胞数量及种类显著增加,但外毛细胞、螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞免疫前后均未见凋亡表达.免疫组化染色显示,正常小鼠内耳中Fas表达广泛,FasL在部分螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞表达,bcl-2仅在螺旋神经节细胞、前庭神经节细胞有较强表达.免疫后FasL在各种组织均有较强表达,bcl-2在外毛细胞出现表达,在耳蜗神经元细胞的表达增加.RT-PCR检测正常小鼠内耳组织的Fas mRNA、FasL mRNA、bcl-2 mRNA均为阳性,FasL mRNA低水平表达,免疫后升高,在2周达到高峰后逐渐下降;bcl-2 mRNA在免疫后进行性升高.
结论Fas/FasL信号系统介导的凋亡与自身免疫性内耳病的发生、发展过程关系密切,bcl-2对内耳中Fas/FasL介导的凋亡有重要的调节作用.
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