论文部分内容阅读
目的 在大肠埃希菌中表达和纯化C反应蛋白(CRP),并鉴定纯化蛋白的免疫反应性,为CRP的检测打基础.方法 应用逆转录(RT)PCR方法,从人肝细胞文库中扩增人C反应蛋白cDNA基因片段,与表达质粒载体pCRT7/NT TOPO重组,获得表达质粒CRP-pCRT7/NT.用氨苄青霉素平板筛选转化子,双酶切与DNA测序鉴定CRP基因表达质粒pCRT7/NT TOPO载体的整合状态,用IPTG诱导表达,并经组氨酸亲和层析柱纯化获得CRP的蛋白纯品.采用Western印迹的方法鉴定纯化蛋白的免疫反应性.结果 利用表达载体pCRT7/NT TOPO载体表达的含6个组氨酸标签的CRP,在SDS-PAGE上出现1条相对分子质量约30 000的阳性条带,经组氨酸亲和层析柱纯化后用Western印迹杂交证实为目的蛋白.结论 成功地构建了在大肠埃希菌表达CRP的质粒,建立了蛋白纯化的系统,为下一步CRP检测试剂盒的制备打下了基础。