论文部分内容阅读
本研究利用植物内生菌与宿主植物长年协同进化，发生基因漂移可能性大这一优势，从各地区的海南粗榧样品中分离内生真菌，并检测这些内生真菌是否能产高三尖杉酯碱或具备产生高三尖杉酯碱的潜力。
目前已经分离得到214株海南粗榧内生真菌，通过显微形态观察和菌落形态观察，对其中的134株进行了简单的种属鉴定，分属39个属，未知属的有37株，种属分布范围非常广。建立了内生真菌发酵产物中生物碱提取的工艺流程，可以稳定地从海南粗榧内生真菌发酵产物中提取生物碱类物质。
通过HPLC-UV的方法检测了其中24株内生真菌发酵产物中的生物碱类物质，发现有6株内生真菌的发酵产物中包含与高三尖杉酯碱标准品保留时间相似的生物碱；对保留时间相似的发酵产物添加标准品作为内标，发现菌株54041307的一个发酵产物可与高三尖杉酯碱标准品产生融合峰；对该发酵产物进行HPLC-MS和MS-MS检测后发现该发酵产物与高三尖杉酯碱标准品的质谱图和二级质谱图完全相同，由此判断该菌株可产高三尖杉酯碱。
通过分子生物学的方法对菌株54041307进行了种属鉴定，在GENBANK上比对ITS序列，没有高相关性序列的报道，最相近序列报道是来自一株未培养土壤微生物，ITS序列也仅有84％的一致性。