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目的:初步了解磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)在急性发作期哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC)中的活化情况,并观察其特异性抑制剂Wortmannin(渥曼青霉素)对Th1、Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4表达的影响,初步探讨PI3K信号转导途径在哮喘患者T细胞免疫紊乱中,参与Th1/Th2失衡的作用机制。方法:以20例急性发作期哮喘患者(男性12例,女性8例,平均年龄:30±9.6岁)作为实验组,15例健康人(男性9例,女性6例,平均年龄28±8.9岁)为对照组。哮喘患者进入本实验前未经过激素治疗;健康者经自愿体检,近期无感染及过敏性疾病史。每一研究对象于清晨空腹时,无菌肝素抗凝抽取静脉血5ml(哮喘患者于使用激素前),Ficoll密度梯度离心法提取获得PBMC。半定量RT-PCR法测定PBMC中PI3KmRNA的表达,ELISA法测定未经Wortmannin干预及不同浓度组Wortmannin处理的PBMC培养上清液中IFN-γ、IL-4水平。结果:(1)电泳结果显示:实验中所有扩增产物都出现了内参β-actin基因的253bp扩增带和PI3K基因的500bp扩增带,哮喘组PI3K基因扩增带亮度明显强于对照组。半定量结果分析显示:正常对照组PBMC中PI3KmRNA的表达较低(0.521±0.133),急性发作期哮喘患者PBMC中PI3KmRNA的表达(0.649±0.143)则高于正常对照组,表达差异显著有统计学意义(P<0.05)。(2)上清液中IFN-γ、IL-4检测:哮喘患者PBMC培养上清液中IFN-γ水平低下、IL-4水平升高,与对照组比较差异均有显著性(P<0.01和P<0.01);同时加入不同浓度Wortmannin共培养后,实验发现均浓度依赖性地抑制了哮喘组及对照组IL-4的产生(P<0.05或P<0.01),而同组不同浓度梯度组间比较IFN-γ产生差异无显著性(P>0.05)。结论:(1)急性发作期哮喘患者PBMC PI3KmRNA表达明显增高,提示PI3K信号转导途径活化参与了哮喘的免疫学发病机制。(2)Wortmannin能浓度依赖性地抑制由CD3mAb诱导的哮喘组和对照组PBMC培养上清液中IL-4的产生,而对IFN-γ产生无明显影响。说明Wortmannin对Th1型细胞因子的产生无抑制作用,而对Th2型细胞因子的产生有抑制作用。由此推论:PI3K过度活化对Th1型细胞因子IFN-γ影响不明显,有可能主要是介导Th2型细胞因子IL-4的产生而参与Th1/Th2的失衡,其特异抑制剂Wortmannin可能主要通过抑制Th2细胞因子的活性而调节哮喘患者存在的Th1/Th2失衡。