论文部分内容阅读
目的：从形态学、生物化学、分子生物学角度观察从柴胡中提取的单体成分柴胡皂甙d对白血病细胞株K562和HL-60生长的影响作用及其可能机制。
方法：分别用5μg/ml、7.5μg/ml、10μg/ml浓度的SSd作用于K562及HL-60细胞株，于不同时间段分别计数其平均细胞数并绘制相应生长曲线计算平均抑制率。软琼脂法集落生成实验观察不同浓度药物作用后细胞成集落能力。药物作用后12、24、36、48、60小时，计算分裂指数、荧光染色法观察其凋亡状况、间接免疫荧光法测Bcl-2表达状况。
结果：在本实验中，生长曲线、平均抑制率结果为：10μg/mlSSd作用1～5天后，HL-60细胞的平均抑制率分别为17.1％、28.6％、56.0％、67.7％、71.3％；K562细胞株的平均抑制率分别为21.7％、49.2％、70.3％、77.8％、86.7％。以5.0μg/ml、7.5μg/ml、10μg/mlSSd作用1天后，HL-60细胞的平均抑制率分别为4.3％、11.4％、17.1％。K562细胞平均抑制率分别为10.7％、15.2％、21.7％。10μg/mlSSd作用1天后，HL-60、K562细胞的平均抑制率分别为17.1％、21.7％。分裂指数测定结果为：0μg/ml、5.0μg/ml、7.5μg/ml、10μg/mlSSd作用24小时后HL-60细胞的分裂指数分别为：21％、12％、10％、8％；K562细胞的分裂指数分别为20％、13％、10％、8％。集落形成试验结果为：5.0μg/ml、7.5μg/ml、10μg/mlSSd作用后，HL-60细胞的集落抑制率分别为85.4％、87.6％、93.3％；K562细胞的集落抑制率分别为88.2％、93.6％、95.4％。荧光染色结果显示：K562在10μg/ml处理24小时后，开始出现凋亡小体，48小时后出现大量死细胞。HL-60在10μg/ml处理24小时后开始出现凋亡小体，48小时后出现大量死细胞。Bcl-2间接免疫荧光法：经SSd作用后两种细胞Bcl-2基因表达都下降，随作用后的时间延长下降幅度增加。
结论：SSd能抑制K562和HL-60细胞增殖，这种抑制作用呈时间和剂量依赖关系(P＜0.05)，并且对K562细胞作用较为明显，而且SSd能诱导细胞凋亡，并下调Bcl-2的表达。